| 摘要 | 第7-13页 |
| ABSTRACT | 第13-21页 |
| 第一章 绪论 | 第26-47页 |
| 1.1 胆石病概况 | 第26-27页 |
| 1.2 胆固醇结石发生机制 | 第27-28页 |
| 1.3 胆固醇结石的基因学研究和危险因素 | 第28-40页 |
| 1.3.1 参与胆汁脂质代谢及转运的蛋白质 | 第31-36页 |
| 1.3.2 肠道胆固醇的重吸收 | 第36-37页 |
| 1.3.3 胆固醇的理化改变 | 第37-39页 |
| 1.3.4 胆囊动力与胆囊收缩素 | 第39-40页 |
| 1.4 胆石病与代谢综合征 | 第40-42页 |
| 1.5 FOXO1 | 第42-44页 |
| 1.6 本研究的目的、方法、实验设计及意义 | 第44-47页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第44页 |
| 1.6.2 研究方法 | 第44-45页 |
| 1.6.3 实验设计 | 第45-46页 |
| 1.6.4 研究意义 | 第46-47页 |
| 第二章 FOXO1对人肝细胞基因转录调控的体外研究 | 第47-81页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第47-49页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第47页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2.1.3 材料和试剂 | 第48-49页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第49页 |
| 2.2 实验方法 | 第49-59页 |
| 2.2.1 细胞培养与冻存 | 第49-50页 |
| 2.2.2 慢病毒滴度检测 | 第50页 |
| 2.2.3 慢病毒侵染HepG2细胞 | 第50-51页 |
| 2.2.4 实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-Time PCR) | 第51-55页 |
| 2.2.5 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第55-58页 |
| 2.2.6 嘌呤霉素对HepG2细胞致死浓度筛选实验 | 第58-59页 |
| 2.2.7 低表达FOXO1和高表达FOXO1 HepG2细胞株筛选 | 第59页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第59页 |
| 2.3 实验结果 | 第59-77页 |
| 2.3.1 慢病毒侵染293T细胞 | 第59-60页 |
| 2.3.2 慢病毒侵染HepG2细胞 | 第60-61页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR检测慢病毒侵染HepG2细胞FOXO1的mRNA水平 | 第61-65页 |
| 2.3.4 Western Blot检测慢病毒侵染HepG2细胞FOXO1的蛋白水平 | 第65-67页 |
| 2.3.5 嘌呤霉素致死浓度筛选结果 | 第67-68页 |
| 2.3.6 慢病毒侵染HepG2稳定细胞株筛选 | 第68-69页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR检测HepG2稳筛细胞株FOXO1的mRNA水平 | 第69-70页 |
| 2.3.8 Western Blot检测侵染HepG2稳筛细胞株FOXO1的蛋白水平 | 第70-72页 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR检测HepG2稳筛细胞株脂类基因的mRNA水平 | 第72-75页 |
| 2.3.10 Western Blot检测检测HepG2稳筛细胞株FXR和CYP7A1的蛋白水平 | 第75-77页 |
| 2.4 讨论 | 第77-81页 |
| 第三章 小鼠FoxO1基因过表达和ShRNA干扰腺病毒载体构建与鉴定 | 第81-101页 |
| 3.1 实验仪器和材料 | 第82-85页 |
| 3.1.1 研究对象 | 第82-83页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第83页 |
| 3.1.3 材料和试剂 | 第83-84页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第84-85页 |
| 3.2 实验方法 | 第85-94页 |
| 3.2.1 FoxO1过表达腺病毒载体构建 | 第85-88页 |
| 3.2.2 FoxO1过表达腺病毒载体的验证 | 第88-89页 |
| 3.2.3 shRNA腺病毒载体构建 | 第89-91页 |
| 3.2.4 病毒包装 | 第91-92页 |
| 3.2.5 shRNA腺病毒载体沉默效果的验证 | 第92页 |
| 3.2.6 Western Blot检测目的蛋白的表达 | 第92页 |
| 3.2.7 病毒扩增及纯化 | 第92-93页 |
| 3.2.8 病毒滴度测定 | 第93-94页 |
| 3.3 实验结果 | 第94-99页 |
| 3.3.1 FoxO1过表达腺病毒载体构建 | 第94-95页 |
| 3.3.2 FoxO1过表达腺病毒载体的验证 | 第95-96页 |
| 3.3.3 shRNA腺病毒载体构建 | 第96-98页 |
| 3.3.4 shRNA腺病毒载体沉默效果的验证 | 第98-99页 |
| 3.3.5 FoxO1过表达腺病毒滴度 | 第99页 |
| 3.3.6 shRNA腺病毒滴度 | 第99页 |
| 3.4 讨论 | 第99-101页 |
| 第四章 FoxO1与胆固醇结石形成的体内研究 | 第101-116页 |
| 4.1 实验仪器与材料 | 第102-103页 |
| 4.1.1 实验动物与饲料 | 第102页 |
| 4.1.2 实验分组 | 第102页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第102-103页 |
| 4.1.4 材料和试剂 | 第103页 |
| 4.2 实验方法 | 第103-105页 |
| 4.2.1 小鼠尾静脉注射 | 第103页 |
| 4.2.2 标本采集 | 第103页 |
| 4.2.3 胆囊致石评定 | 第103-104页 |
| 4.2.4 胆汁生化检测及CSI的计算 | 第104页 |
| 4.2.5 小鼠血清生化检测 | 第104页 |
| 4.2.6 实时荧光定量PCR检测肝脏基因表达 | 第104-105页 |
| 4.2.7 Western Blot检测肝脏基因表达 | 第105页 |
| 4.3 实验结果 | 第105-111页 |
| 4.3.1 C57BL/6小鼠生长情况及体重改变 | 第105-106页 |
| 4.3.2 C57BL/6小鼠胆囊致石结果 | 第106-107页 |
| 4.3.3 胆汁脂类检测及CSI的计算 | 第107页 |
| 4.3.4 小鼠血清学脂质检测 | 第107-108页 |
| 4.3.5 实时荧光定量PCR检测肝脏基因表达 | 第108-110页 |
| 4.3.6 Westernb Blot检测肝脏相关蛋白表达 | 第110-111页 |
| 4.4 讨论 | 第111-116页 |
| 第五章 主要结论及展望 | 第116-118页 |
| 5.1 主要结论 | 第116页 |
| 5.2 展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-133页 |
| 附录1: 主要英文缩略词索引 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 | 第136页 |
