| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 核酸酶的研究进展 | 第11-16页 |
| 1.1.1 核酸酶的简介 | 第11页 |
| 1.1.2 核酸酶的分类 | 第11-13页 |
| 1.1.3 HNH核酸酶超家族的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.4 微生物中核酸酶的研究进展及应用 | 第15-16页 |
| 1.2 微小杆菌的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 微小杆菌的简介 | 第16页 |
| 1.2.2 微小杆菌的应用 | 第16-17页 |
| 1.2.3 微小杆菌核酸酶的研究进展 | 第17-19页 |
| 第二章 分泌耐热DNA酶的细菌的分离鉴定 | 第19-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 培养基 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-22页 |
| 2.2.1 菌种富集培养和分离纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.2 菌株yc3的菌落形态观察 | 第20页 |
| 2.2.3 菌株yc3的生长曲线测定 | 第20页 |
| 2.2.4 yc3的分类鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.5 菌株yc3的粗酶液中DNA酶活性的测定 | 第21-22页 |
| 2.2.6 菌株yc3的粗酶液中RNA酶活性的测定 | 第22页 |
| 2.2.7 菌株yc3的粗酶液中DNA酶耐热性的测定 | 第22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-26页 |
| 2.3.1 yc3的菌落形态观察 | 第22页 |
| 2.3.2 yc3的分类鉴定 | 第22-24页 |
| 2.3.2.1 yc3的16S rDNA的序列分析及系统发育树的构建 | 第22-24页 |
| 2.3.3 yc3生长曲线测定 | 第24-25页 |
| 2.3.4 微小杆菌yc3粗酶液中DNA酶活性的测定 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26页 |
| 2.5 小结 | 第26-27页 |
| 第三章 微小杆菌YC3中耐热DNA酶的分离纯化及鉴定 | 第27-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第27页 |
| 3.1.1 菌种 | 第27页 |
| 3.1.2 培养基 | 第27页 |
| 3.1.3 试剂材料 | 第27页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 3.2.1 微小杆菌yc3的粗酶液的制备及粗酶液DNA酶活性的测定 | 第27-28页 |
| 3.2.2 微小杆菌yc3产DNA酶最适培养基的确定 | 第28页 |
| 3.2.3 粗酶液中DNA酶的酶学特性的研究 | 第28页 |
| 3.2.4 微小杆菌yc3分泌的耐热DNA酶的分离纯化 | 第28-30页 |
| 3.2.5 纯化的DNA酶的酶学特性测定 | 第30页 |
| 3.2.6 DNA酶的鉴定 | 第30页 |
| 3.3 结果与分析 | 第30-40页 |
| 3.3.1 微小杆菌yc3最适产DNA酶培养基和最适培养时间的测定 | 第30-31页 |
| 3.3.2 粗酶液中DNA酶酶学特性的研究 | 第31-34页 |
| 3.3.3 微小杆菌yc3耐热DNA酶的分离纯化 | 第34-37页 |
| 3.3.4 纯化的20 kDa蛋白的DNA酶酶学特性测定 | 第37-40页 |
| 3.3.5 纯化的20 kDa蛋白的鉴定 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-43页 |
| 第四章 微小杆菌YC3中耐热DNA酶的克隆、表达、纯化及酶学特性的研究 | 第43-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 质粒及宿主菌 | 第43页 |
| 4.1.2 培养基 | 第43页 |
| 4.1.3 酶和试剂 | 第43页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第43-44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-50页 |
| 4.2.1 微小杆菌yc3中耐热DNA酶基因的PCR扩增及序列分析 | 第44-45页 |
| 4.2.2 EheA的重组表达 | 第45-47页 |
| 4.2.3 重组EheA的纯化 | 第47-48页 |
| 4.2.4 重组EheA的DNA酶活性的测定 | 第48页 |
| 4.2.5 重组EheA的酶学特性的研究 | 第48页 |
| 4.2.6 突变体H64A、H116A、N89A、N108A、N141A和N156A的克隆、表达、纯化及DNA酶活性的测定 | 第48-50页 |
| 4.2.7 EheA蛋白在微小杆菌中的分布研究 | 第50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-77页 |
| 4.3.1 EheA引物的设计及基因的克隆 | 第50-52页 |
| 4.3.2 EheA的重组表达 | 第52-55页 |
| 4.3.3 MBP-eheA和MBP-pigE的纯化及DNA酶活性的测定 | 第55-59页 |
| 4.3.4 融合蛋白MBP-tev-eheA的克隆、表达、纯化及DNA酶活性的测定 | 第59-62页 |
| 4.3.5 重组EheA的纯化 | 第62-64页 |
| 4.3.6 重组EheA的酶学特性的测定 | 第64-66页 |
| 4.3.7 突变体融合蛋白H64A、H116A、N89A、N108A、N141A和N156A的克隆、表达、纯化及DNA酶活性的测定 | 第66-75页 |
| 4.3.8 EheA基因在微小杆菌属中的分布 | 第75-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-79页 |
| 4.5 小结 | 第79-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 研究的主要创新点 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 附录 | 第91-99页 |
| 附录一 | 第91-96页 |
| 附录二 | 第96-98页 |
| 附录三 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
