摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-8页 |
1 文献综述 | 第8-18页 |
·真核启动子的概述 | 第8-10页 |
·启动子的结构 | 第8-9页 |
·RNA聚合酶 | 第9页 |
·转录因子 | 第9-10页 |
·启动子的类型 | 第10-13页 |
·组成型启动子 | 第10-11页 |
·诱导型启动子 | 第11页 |
·组织特异型启动子 | 第11-13页 |
·启动子序列的分析方法 | 第13-14页 |
·TRANSAFC数据库 | 第13页 |
·PLACE数据库 | 第13页 |
·PlantCARE数据库 | 第13-14页 |
·启动子的功能检测 | 第14-15页 |
·启动子表达活性强弱分析 | 第14页 |
·启动子的缺失分析 | 第14-15页 |
·植物遗传转化法 | 第15-16页 |
·根瘤农杆菌介导的遗传转化法 | 第15页 |
·根瘤农杆菌转化的分子机制 | 第15-16页 |
·其他植物转基因方法 | 第16页 |
·本课题研究目的和意义 | 第16页 |
·本课题的技术路线 | 第16-18页 |
2 材料和方法 | 第18-31页 |
·材料 | 第18-21页 |
·植物材料 | 第18页 |
·宿主菌与质粒 | 第18页 |
·工具酶和生化试剂 | 第18页 |
·主要仪器设备 | 第18页 |
·常用培养基配制 | 第18-19页 |
·常用抗生素储备液浓度 | 第19页 |
·CTAB法提取植物总DNA所用溶液 | 第19页 |
·碱法提取质粒DNA的溶液配制 | 第19-20页 |
·GUS酶活性检测所用溶液 | 第20页 |
·培养基相关溶液配制 | 第20-21页 |
·实验方法 | 第21-31页 |
·CTAB法提取植物总DNA | 第21-22页 |
·PCR克隆启动子序列、酶切位点的分析 | 第22-23页 |
·大肠杆菌DH5α感受态细胞制备 | 第23页 |
·DNA片段的回收和纯化 | 第23-24页 |
·PCR扩增片段与pMD18-TVector的连接 | 第24页 |
·接产物转化大肠杆菌DH5α | 第24页 |
·质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
·载体构建全过程及5’端筛检示意图 | 第25-26页 |
·重组质粒的构建 | 第26-27页 |
·农杆菌感受态的制备 | 第27页 |
·重组质粒转化根癌农杆菌 | 第27-28页 |
·根瘤农杆菌介导的水稻转化 | 第28页 |
·转基因植株的hyg基因和目的片段的PCR检测 | 第28-29页 |
·GUS基因的组织化学染色 | 第29页 |
·GUS酶活性检测 | 第29-31页 |
3 结果与分析 | 第31-44页 |
·DULL1和Shrunken 1基因启动子的克隆与序列分析 | 第31-35页 |
·酶切位点选择 | 第31-32页 |
·片段克隆结果 | 第32页 |
·序列分析结果 | 第32-35页 |
·表达载体的构建结果 | 第35-36页 |
·水稻的遗传转化及转基因植株的分子检测 | 第36-38页 |
·GUS组织染色结果与分析 | 第38-41页 |
·筛检片段的克隆、分析和转基因株的检测 | 第41-42页 |
·GUS定量检测 | 第42-44页 |
4 讨论 | 第44-46页 |
5 结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-53页 |
附录A:中英文缩写与注释 | 第53-54页 |
附录B:双元表达载体pCAMBIA1301示意图 | 第54-55页 |
致谢 | 第55-56页 |
个人简介 | 第56页 |
攻读硕士学位期间研究成果 | 第56页 |