| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-34页 |
| ·选题意义 | 第15-16页 |
| ·研究现状 | 第16-32页 |
| ·纤维素简介 | 第16-18页 |
| ·纤维素酶简介 | 第18-21页 |
| ·纤维素酶作用机制 | 第21-23页 |
| ·纤维素酶GH45家族(EG) | 第23-24页 |
| ·纤维素酶Linker研究进展 | 第24-30页 |
| ·纤维素酶研究方法 | 第30-32页 |
| ·研究目的及内容 | 第32-34页 |
| ·研究目的 | 第32-33页 |
| ·研究内容 | 第33-34页 |
| 第2章 内切葡聚糖酶Linker结构分析及基因修饰 | 第34-45页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌株与培养基 | 第34-35页 |
| ·试剂与仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·eg2与Linker的生物信息学分析及结构预测 | 第35-36页 |
| ·关键位点的确定及突变组设计 | 第36页 |
| ·Linker基因的修饰 | 第36-37页 |
| ·DNA产物纯化 | 第37页 |
| ·重组质粒构建 | 第37-38页 |
| ·重组菌的构建 | 第38-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-44页 |
| ·eg2与Linker的生物信息学分析 | 第39-42页 |
| ·重叠PCR | 第42-43页 |
| ·重组质粒构建 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆筛选及双酶切验证 | 第44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第3章 内切葡聚糖酶Linker重组蛋白酶学特性研究 | 第45-57页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·菌株和培养基 | 第45页 |
| ·试剂与仪器 | 第45-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第47页 |
| ·酶活力测定 | 第47页 |
| ·蛋白质标准曲线及蛋白质含量的测定 | 第47页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第47-48页 |
| ·发酵罐发酵重组菌 | 第48-49页 |
| ·粗酶液的制备 | 第49页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备及电泳 | 第49-50页 |
| ·酶学特性分析 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-56页 |
| ·BSA标准曲线的绘制 | 第50-51页 |
| ·重组菌的发酵和粗酶液制备 | 第51页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE分析纯化样品 | 第51-52页 |
| ·酶学特性 | 第52-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第4章 EG Ⅱ隧道入口处色氨酸的功能研究 | 第57-65页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·EG Ⅱ结构功能分析 | 第58页 |
| ·eg2的基因修饰 | 第58页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第58-59页 |
| ·重组菌表达和目的蛋白纯化 | 第59页 |
| ·分析方法 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-64页 |
| ·EG Ⅱ结构功能分析 | 第59-62页 |
| ·重组菌表达和目的蛋白纯化 | 第62-63页 |
| ·目的蛋白的酶学特性 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第5章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-79页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |