| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一部分 1型单纯疱疹病毒的分离鉴定及增殖特性分析 | 第8-23页 |
| 1 前言 | 第8-10页 |
| 2 实验材料 | 第10-12页 |
| ·细胞 | 第10页 |
| ·引物序列 | 第10页 |
| ·试剂及耗材 | 第10-11页 |
| ·实验动物 | 第11页 |
| ·仪器设备 | 第11-12页 |
| 3 实验方法 | 第12-16页 |
| ·细胞培养 | 第12页 |
| ·病毒分离 | 第12-13页 |
| ·病毒蚀斑纯化 | 第13页 |
| ·病毒PCR鉴定 | 第13-15页 |
| ·病毒的电镜观察 | 第15页 |
| ·病毒滴度测定 | 第15页 |
| ·病毒在不同细胞增殖特性 | 第15页 |
| ·病毒生长曲线测定 | 第15页 |
| ·动物神经毒力实验 | 第15-16页 |
| 4 实验结果 | 第16-21页 |
| ·病毒的噬斑纯化 | 第16页 |
| ·病毒PCR检测 | 第16-17页 |
| ·病毒电镜结果 | 第17-18页 |
| ·病毒在不同细胞病变情况 | 第18-19页 |
| ·病毒感染不同细胞生长曲线测定 | 第19-20页 |
| ·动物神经毒力实验 | 第20-21页 |
| 5 实验讨论 | 第21-23页 |
| 第二部分 低代次1型疱疹病毒全基因组测序及初步分析 | 第23-51页 |
| 1 前言 | 第23-25页 |
| 2 实验材料 | 第25-30页 |
| ·病毒株和细胞 | 第25页 |
| ·引物序列 | 第25-29页 |
| ·主要参考序列 | 第29-30页 |
| ·序列分析软件及在线分析系统 | 第30页 |
| 3 实验方法 | 第30-34页 |
| ·病毒全基因组提取 | 第30页 |
| ·基因组限制性片段长度多态性分析 | 第30-31页 |
| ·病毒全基因组的二代测序 | 第31页 |
| ·病毒全基因组的修补 | 第31-33页 |
| ·病毒全基因组序列的组装及提交 | 第33页 |
| ·病毒全基因组分析 | 第33-34页 |
| 4 实验结果 | 第34-46页 |
| ·病毒基因组提取及限制性片段长度多态性分析 | 第34-35页 |
| ·基因组Illumina测序结果 | 第35页 |
| ·基因组的PCR缺口修补 | 第35-37页 |
| ·病毒基因组基因预测 | 第37页 |
| ·病毒基因组结构 | 第37-39页 |
| ·病毒的点阵分析 | 第39页 |
| ·进化树的构建 | 第39-42页 |
| ·病毒基因组简单重复序列分析 | 第42-46页 |
| 5 实验讨论 | 第46-51页 |
| 第三部分 基于CRISPR-Cas9技术的重组单纯疱疹病毒的构建 | 第51-57页 |
| 1 前言 | 第51-52页 |
| 2 实验材料 | 第52页 |
| ·病毒株及细胞 | 第52页 |
| ·质粒 | 第52页 |
| ·引物序列 | 第52页 |
| 3 实验方法 | 第52-53页 |
| ·细胞转染 | 第52页 |
| ·病毒感染 | 第52页 |
| ·病毒的噬斑纯化 | 第52-53页 |
| ·PCR检测病毒TK基因 | 第53页 |
| 4 实验结果 | 第53-55页 |
| ·Cas9诱导病毒基因组同源重组 | 第53-54页 |
| ·重组病毒的噬斑纯化及TK基因检测 | 第54-55页 |
| 5 实验讨论 | 第55-57页 |
| 第四部分 HSV1与端粒长度变化的细胞模型建立的初步研究 | 第57-65页 |
| 1 前言 | 第57-58页 |
| 2 实验材料 | 第58页 |
| ·病毒株和细胞 | 第58页 |
| ·引物序列 | 第58页 |
| 3 实验方法 | 第58-59页 |
| ·病毒感染 | 第58页 |
| ·病毒感染后细胞端粒长度测定 | 第58-59页 |
| 4 实验结果 | 第59-63页 |
| ·端粒长度PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第59-60页 |
| ·标准曲线绘制 | 第60-61页 |
| ·KMB17随传代次数增加端粒缩短 | 第61页 |
| ·病毒感染对细胞端粒影响 | 第61-63页 |
| 5 实验讨论 | 第63-65页 |
| 实验小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录Ⅰ HSV1-ZW6全基因组序列编码基因列表 | 第71-77页 |
| 附录Ⅱ 重组荧光病毒测序 | 第77-78页 |
| 附录Ⅲ 英文缩写词表 | 第78-79页 |
| 附录Ⅳ 主要溶液及培养基配制 | 第79-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 研究生简历 | 第83-84页 |
