| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-24页 |
| ·嗜热酶 | 第13-14页 |
| ·蛋白质稳定机制 | 第14-18页 |
| ·氢键 | 第14-16页 |
| ·其他稳定蛋白的因素 | 第16-18页 |
| ·提高蛋白质稳定性的方法 | 第18-19页 |
| ·诱变 | 第18页 |
| ·降低去折叠熵 | 第18-19页 |
| ·采用固定化的手段 | 第19页 |
| ·蛋白质稳定性分析技术 | 第19页 |
| ·嗜热酯酶APE1547 简介 | 第19-21页 |
| ·研究背景与设计思路 | 第21-24页 |
| ·研究背景 | 第21-22页 |
| ·设计思路 | 第22-23页 |
| ·实验方案 | 第23页 |
| ·研究意义 | 第23-24页 |
| 第2章 嗜热酯酶 APE1547 突变体的构建、表达及分离纯化 | 第24-34页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·实验试剂 | 第25页 |
| ·溶液配制 | 第25页 |
| ·培养基配制 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·突变体的构建 | 第26页 |
| ·突变体菌种的培养 | 第26-27页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第27页 |
| ·PCR 法扩增突变体基因 | 第27-28页 |
| ·DpnI 限制性酶切及回收 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的转化与鉴定 | 第29页 |
| ·Ni-NTA 柱亲和层析纯化蛋白 | 第29-30页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30页 |
| ·Bradford 法测定蛋白浓度 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-33页 |
| ·全质粒PCR 扩增突变体片段 | 第31页 |
| ·突变位点测序分析 | 第31-32页 |
| ·酶的分离纯化 | 第32-33页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第3章 嗜热酯酶 APE1547 及其突变体的酶学性质研究 | 第34-41页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·实验试剂 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·酯酶最适反应温度和相对酶活力测定 | 第34-35页 |
| ·酯酶的动力学测定 | 第35页 |
| ·酯酶的热稳定性测定 | 第35页 |
| ·盐酸胍诱导变性后酶的残余活力和荧光光谱的测定 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·酯酶最适反应温度和酶活力测定 | 第35-36页 |
| ·酯酶的动力学测定 | 第36-37页 |
| ·酯酶的热稳定性测定 | 第37-38页 |
| ·荧光光谱分析酯酶的三级结构的变化 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第4章 APE1547 推进器蛋白及其突变体的结构比较 | 第41-52页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·实验仪器 | 第41-42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·推进器结构域的基因克隆 | 第42-43页 |
| ·目的基因的限制性酶切和回收 | 第43-44页 |
| ·质粒载体的酶切、回收及去磷酸化 | 第44页 |
| ·连接、转化与单克隆筛选 | 第44-45页 |
| ·酯酶APE1547 及其突变体的表达与纯化 | 第45页 |
| ·荧光光谱的测定 | 第45页 |
| ·热稳定性测定 | 第45-46页 |
| ·盐酸胍诱导变性 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-50页 |
| ·目的基因的PCR 扩增和纯化 | 第46页 |
| ·β-推进器结构域的分离纯化 | 第46-47页 |
| ·荧光光谱研究推进器结构域的三级结构变化 | 第47-48页 |
| ·热稳定性测定 | 第48-49页 |
| ·盐酸胍诱导变性 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第5章 结论 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
