| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-28页 |
| 1 Hippo信号通路的研究 | 第15-20页 |
| ·Hippo信号通路的发现 | 第15-16页 |
| ·Hippo信号通路的组成 | 第16-19页 |
| ·Hippo信号通路的核心元件 | 第16-17页 |
| ·Hippo信号通路的上游成分 | 第17-19页 |
| ·Hippo信号通路的下游成分 | 第19页 |
| ·Hippo信号通路的作用 | 第19-20页 |
| ·Hippo信号通路与干细胞增殖 | 第19-20页 |
| ·Hippo信号通路与细胞周期的调控 | 第20页 |
| ·Hippo信号通路与肿瘤 | 第20页 |
| 2 模式生物-家蚕 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-28页 |
| 第二章 研究目的与研究内容 | 第28-31页 |
| 1 研究目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 研究的主要内容 | 第29页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要基因的克隆及序列分析 | 第29页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要基因的表达谱分析 | 第29页 |
| ·BmYKI1及其突变体BmYKI1~(S97A)的亚细胞定位及蛋白水平检测 | 第29页 |
| ·过表达BmYki1和BmYki1~(S97A)对细胞大小及周期的影响 | 第29页 |
| ·抑制家蚕Yki基因表达对家蚕翅原基发育及家蚕培养细胞的影响 | 第29页 |
| 3 技术路线 | 第29-31页 |
| 第三章 家蚕Hippo信号通路主要基因的克隆及序列分析 | 第31-56页 |
| 摘要 | 第31-32页 |
| 1 材料与方法 | 第32-41页 |
| ·实验材料 | 第32-35页 |
| ·载体与菌种 | 第32页 |
| ·生物材料 | 第32页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第32页 |
| ·其他试剂 | 第32-33页 |
| ·主要实验试剂与配制 | 第33-35页 |
| ·常用仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-41页 |
| ·家蚕Hippo信号通路相关基因的电子克隆 | 第35-36页 |
| ·总RNA提取 | 第36页 |
| ·RNA反转录成cDNA | 第36页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第36-37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·DNA连接反应体系(20μL) | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第38页 |
| ·碱裂解法少量制备质粒DNA | 第38-39页 |
| ·DNA酶切反应体系(20μL) | 第39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·目的片段的分离和回收 | 第40页 |
| ·Hippo信号通路相关基因高级结构域分析 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-53页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要基因的电子克隆 | 第41页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要基因的克隆与序列测定 | 第41-46页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要组件的高级结构分析 | 第46-49页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要组件的结构域分析 | 第49-50页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要组件的信号肽序列分析 | 第50页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要组件的同源性分析 | 第50页 |
| ·BmYKI的同源性比较与进化分析 | 第50-53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第四章 家蚕Hippo信号通路主要基因的表达谱分析 | 第56-76页 |
| 摘要 | 第56-57页 |
| 1 材料与方法 | 第57-58页 |
| ·材料与主要试剂 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-73页 |
| ·基于microarray数据库的家蚕Hippo信号通路主要基因的表达谱分析 | 第58-59页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要基因在五龄第3天家蚕不同组织的表达谱分析 | 第59-60页 |
| ·家蚕Hippo信号通路主要基因在性腺不同发育时期的表达谱分析 | 第60页 |
| ·五龄第3天家蚕不同组织Hippo信号通路主要基因mRNA的相对丰度比较 | 第60页 |
| ·不同发育阶段的性腺组织Hippo信号通路主要基因mRNA的相对丰度比较 | 第60-73页 |
| 3 讨论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 第五章 BmYKI1及BmYKI1~(S97A)的亚细胞定位及蛋白水平检测 | 第76-91页 |
| 摘要 | 第76-77页 |
| 1 材料与方法 | 第77-82页 |
| ·材料与试剂 | 第77页 |
| ·主要实验试剂的配制 | 第77-79页 |
| ·实验方法 | 第79-82页 |
| ·表达菌样品的制备 | 第79-80页 |
| ·SDS-PAGE | 第80页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的染色和脱色 | 第80页 |
| ·Western blotting | 第80-81页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第81页 |
| ·细胞转染 | 第81-82页 |
| ·细胞免疫荧光 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-89页 |
| ·BmYki1基因表达载体的构建 | 第82-83页 |
| ·大肠杆菌表达BmYki1与BmYki1多抗的特异性检测 | 第83-84页 |
| ·家蚕主要组织BmYKI1蛋白Western blotting检测 | 第84-85页 |
| ·BmYki1~(S97A)突变体的构建 | 第85-86页 |
| ·BmYki1和BmYki1~(S97A)转基因载体的构建 | 第86-87页 |
| ·BmYKI1和BmYKI1~(S97A)的亚细胞定位 | 第87-89页 |
| 3 讨论 | 第89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 第六章 过表达BmYki1和BmYki1~(S97A)对细胞大小及周期的影响 | 第91-103页 |
| 摘要 | 第91-92页 |
| 1 材料与方法 | 第92-94页 |
| ·材料和主要试剂 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-94页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第92页 |
| ·定量PCR | 第92-94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-101页 |
| ·稳定转化家蚕BmN细胞的筛选与鉴定 | 第94-96页 |
| ·过表达家蚕Yki1,Yki1~(S97A)基因对家蚕BmN细胞大小及细胞周期的影响 | 第96-98页 |
| ·过表达BmYki1,BmYki1~(S97A)基因对家蚕Hippo信号通路上、下游基因的影响 | 第98-101页 |
| 3 讨论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-103页 |
| 第七章 抑制家蚕Yki基因表达对家蚕翅原基发育及家蚕培养细胞的影响 | 第103-115页 |
| 摘要 | 第103-104页 |
| 1 材料与方法 | 第104-105页 |
| ·材料和主要试剂 | 第104页 |
| ·实验方法 | 第104-105页 |
| 2 结果与分析 | 第105-112页 |
| ·转染yki-siRNA-298对家蚕培养细胞Yki1基因表达的影响 | 第105-106页 |
| ·抑制Yki1基因表达对Hippo信号通路上、下游基因的影响 | 第106-108页 |
| ·抑制家蚕Yki1基因表达对家蚕翅原基发育的影响 | 第108-112页 |
| 3 讨论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| 结论 | 第115-116页 |
| 在校期间发表论文情况 | 第116-118页 |
| 附录 | 第118-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
