| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-19页 |
| 1 昆虫杆状病毒表达载体系统概述 | 第10-12页 |
| ·昆虫杆状病毒表达载体系统的发展 | 第10-12页 |
| ·外源基因在昆虫细胞和幼虫的表达 | 第12页 |
| 2 家蚕杆状病毒 BmNPV 表达载体系统优化 | 第12-13页 |
| 3 Red 同源重组技术 | 第13-14页 |
| 4 Red 重组相关蛋白 LEF-3 和 AN | 第14-16页 |
| ·LEF-3 蛋白 | 第14-15页 |
| ·Alkaline Nuclease (AN)蛋白 | 第15-16页 |
| 5 实验方案设计 | 第16-19页 |
| ·选题背景及意义 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| ·实验流程图 | 第18-19页 |
| 第二章 50 bp 同源臂 PCR产物与线性化的 RD-BmBacmid 共转染产生重组病毒快速表达目的蛋白 | 第19-41页 |
| 1 引言 | 第19-20页 |
| 2 材料与试剂 | 第20-21页 |
| ·菌种、细胞株与质粒 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·主要试剂的配制 | 第21页 |
| 3. 方法 | 第21-31页 |
| ·AcGFP-DHA 与线性化的 RD-BmBacmid 共转染 BmN 细胞 | 第21-29页 |
| ·DsRed-DHA 与线性化的 RD-BmBacmid 共转染 BmN 细胞 | 第29页 |
| ·PCR 产物与线性化的 RD-BmBacmid 共转染家蚕幼虫 | 第29-30页 |
| ·感染家蚕中病毒基因组的提取及 PCR 鉴定 | 第30-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-39页 |
| ·RD-BmBacmid 基因组制备和 RD-BmBacmid 的线性化 | 第31-32页 |
| ·RA-L 和 RA-R DNA 片段 PCR 的扩增 | 第32页 |
| ·rAcGFP 和 rDsRed DNA 片段 PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·AcGFP-DHA 和 DsRed-DHA DNA 片段 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·AcGFP-DHA/DsRed-DHA 与线性化的 RD-BmBacmid 共转染 BmN 细胞 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物与线性化 RD-BmBacmid 共转染家蚕幼虫 | 第35-36页 |
| ·Western blotting 检测重组病毒表达的 GFP 蛋白 | 第36-37页 |
| ·Western blotting 检测重组病毒表达的 RFP 蛋白 | 第37-39页 |
| ·病毒基因组 PCR 鉴定 | 第39页 |
| 5 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 Red 重组相关蛋白 LEF-3 和 AN 的克隆表达和纯化 | 第41-64页 |
| 1 引言 | 第41页 |
| 2 材料与试剂 | 第41-42页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41-42页 |
| ·主要试剂的配制 | 第42页 |
| 3 方法 | 第42-53页 |
| ·Red 重组相关蛋白 LEF-3 的基因克隆 | 第42-46页 |
| ·LEF-3 蛋白的诱导表达和纯化 | 第46-48页 |
| ·Red 重组相关蛋白 AN 的基因克隆 | 第48-51页 |
| ·AN 蛋白诱导表达和纯化 | 第51-53页 |
| 4 结果与分析 | 第53-62页 |
| ·PCR 扩增 lef-3 和 an 基因 | 第53页 |
| ·重组质粒 pUC19-lef-3 的鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组质粒 pUC19-an 的鉴定 | 第54-55页 |
| ·序列测定 | 第55页 |
| ·重组质粒 pET28a(+)-lef-3 的鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组质粒 pET28a(+)-lef-3 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白 LEF-3 的 Western blotting 鉴定 | 第57-58页 |
| ·融合蛋白 LEF-3 的纯化 | 第58页 |
| ·重组质粒 pET28a(+)-an 的鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组质粒 pET28a(+)-an 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第59-60页 |
| ·融合蛋白 AN 的 Western blotting 鉴定 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白 AN 的纯化 | 第61-62页 |
| 5 讨论 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
