| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩写说明 | 第11-12页 |
| 第一章 猪卵母细胞IVM及FSHR的研究进展 | 第12-24页 |
| 1. 卵母细胞在体内发生、发育简介 | 第12-15页 |
| ·卵泡的发育和成熟 | 第12-14页 |
| ·卵子在体内的发生和形态结构 | 第14-15页 |
| 2. 卵母细胞体外成熟(IVM)介绍 | 第15-19页 |
| ·卵母细胞体外成熟培养基础培养液 | 第16页 |
| ·基础培养液中添加成分 | 第16-18页 |
| ·卵巢供体的动物种类年龄、所采集的卵泡大小及采集方式和采集的卵子质量 | 第18页 |
| ·卵母细胞体外成熟培养的条件 | 第18-19页 |
| 3. 促卵泡素(FSH)和促黄体生成素(LH)对卵母细胞体外成熟发育的影响 | 第19-20页 |
| 4. 促卵泡素受体(FSHR)基因及其蛋白质结构简介 | 第20-21页 |
| 5. 慢病毒载体 | 第21-24页 |
| 第二章 猪FSHR克隆及慢病毒载体构建 | 第24-52页 |
| 1. 实验材料 | 第24-27页 |
| ·卵巢总RNA提取组织 | 第24页 |
| ·菌株和质粒 | 第24-26页 |
| ·试验试剂及仪器 | 第26-27页 |
| 2. 实验方法 | 第27-36页 |
| ·卵巢组织总RNA的提取、反转录及FSHR基因的扩增 | 第27-29页 |
| ·pMD19-T-FSHR载体的构建、转化、克隆与鉴定 | 第29-32页 |
| ·将FSHR基因从pMD19-T-FSHR重组载体质粒上酶切下来 | 第32-34页 |
| ·慢病毒重组载体CSⅡ-EF-FSHR-IRES2-Venus的构建 | 第34-36页 |
| 3. 实验结果及分析 | 第36-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 猪卵泡颗粒细胞的培养 | 第52-60页 |
| 1. 实验材料 | 第52-53页 |
| ·卵巢组织 | 第52页 |
| ·主要试剂及配制 | 第52-53页 |
| ·主要试验仪器 | 第53页 |
| 2. 实验方法 | 第53-55页 |
| ·猪原代卵泡颗粒细胞的培养 | 第53-54页 |
| ·猪原代卵泡颗粒细胞传代扩大培养 | 第54页 |
| ·猪卵泡颗粒细胞的冻存 | 第54-55页 |
| ·猪卵泡颗粒细胞的解冻 | 第55页 |
| 3. 实验结果及分析 | 第55-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-60页 |
| ·卵巢表面的消毒处理 | 第57页 |
| ·消化酶的选择 | 第57页 |
| ·卵泡液内红细胞与淋巴细胞的处理 | 第57-58页 |
| ·颗粒细胞的快速大量培养 | 第58-60页 |
| 第四章 慢病毒的包装与感染力测定 | 第60-68页 |
| 1. 实验材料 | 第60-63页 |
| ·质粒 | 第60-62页 |
| ·主要试剂及配制 | 第62页 |
| ·主要试验仪器 | 第62-63页 |
| 2. 实验方法 | 第63-65页 |
| ·三质粒用无内毒素大提试剂盒大量提取 | 第63-64页 |
| ·293T细胞的解冻与培养 | 第64页 |
| ·293T细胞的准备、病毒的包装与感染力观察 | 第64-65页 |
| 3. 结果及分析 | 第65-67页 |
| 4. 讨论 | 第67-68页 |
| 第五章 重组载体CSⅡ-EF-FSHR-IRES2-Venus电击法转染颗粒细胞并与卵母细胞共IVM | 第68-82页 |
| 1. 实验材料 | 第68-71页 |
| ·猪卵巢组织 | 第68页 |
| ·主要试剂及配制 | 第68-71页 |
| ·主要试验仪器 | 第71页 |
| 2. 试验方法 | 第71-75页 |
| ·用Lipofectamine~(TM)2000分别转染293T细胞和猪卵泡颗粒细胞 | 第71-72页 |
| ·电击法将CSⅡ-EF-FSHR-IRES2-Venus转染猪原代卵泡颗粒细胞 | 第72页 |
| ·CSⅡ-EF-FSHR-IRES2-Venus转染的颗粒细胞与卵子共IVM | 第72-75页 |
| 3. 结果及分析 | 第75-78页 |
| 4. 讨论 | 第78-82页 |
| ·重构慢病毒载体质粒CSⅡ-EF-FSHR-IRES2-Venus转染猪卵泡颗粒细胞 | 第78-79页 |
| ·猪卵母细胞IVM | 第79页 |
| ·转染CSⅡ-EF-FSHR-IRES2-Venus质粒的颗粒细胞与卵母细胞共培养 | 第79-80页 |
| ·颗粒细胞过表达FSHR对卵母细胞体外成熟影响的分析 | 第80-82页 |
| 全文总结 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
