| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-59页 |
| 第一节 乙酰羟酸合成酶(AHAS)简介 | 第17-19页 |
| 第二节 乙酰羟酸合成酶在生物界中的分布 | 第19-23页 |
| ·细菌 | 第19-22页 |
| ·真菌 | 第22页 |
| ·植物 | 第22-23页 |
| ·其他 | 第23页 |
| 第三节 AHAS催化的反应和反应机制 | 第23-31页 |
| ·AHAS催化的反应 | 第23-24页 |
| ·AHAS催化反应的机制 | 第24-29页 |
| ·支链氨基酸对AHAS活性的反馈抑制 | 第29-31页 |
| 第四节 AHAS亚基间的相互作用 | 第31-35页 |
| 第五节 AHAS的结构 | 第35-46页 |
| ·AHAS的一级氨基酸序列 | 第35-38页 |
| ·AHAS的晶体结构 | 第38-46页 |
| 第六节 AHAS相关的农药以及农药的抗性 | 第46-55页 |
| ·AHAS相关的除草剂 | 第46-49页 |
| ·AHAS其他抑制剂 | 第49-51页 |
| ·除草剂的结合位点 | 第51-53页 |
| ·农药抗性 | 第53-55页 |
| 第七节 本文的立题思想和研究内容 | 第55-59页 |
| 第二章 AHAS调控亚基与催化亚基相互作用关键位点研究 | 第59-117页 |
| 第一节 背景介绍 | 第59-60页 |
| 第二节 研究目的和实验设计 | 第60-63页 |
| 第三节 实验材料与方法 | 第63-87页 |
| ·目的基因定点突变体系的构建 | 第63-69页 |
| ·目的基白的表达以及可溶性鉴定 | 第69-72页 |
| ·目的蛋白的过表达与纯化 | 第72-75页 |
| ·酶活性的测定 | 第75-81页 |
| ·蛋白的荧光探针标记 | 第81-82页 |
| ·体外的GST pulldown实验 | 第82-87页 |
| 第四节 实验结果与讨论 | 第87-113页 |
| ·突变体系的构建 | 第87-90页 |
| ·目的蛋白的纯化结果 | 第90-91页 |
| ·体外GST pulldown实验结果 | 第91-94页 |
| ·调控亚基与催化亚基相互作用关键位点的确定 | 第94-106页 |
| ·大肠杆菌AHAS Ⅲ调控亚基与催化亚基复合物的结构 | 第106-111页 |
| ·大肠杆菌AHAS Ⅲ调控亚基与催化亚基的相互作用 | 第111-113页 |
| 第五节 本章小结 | 第113-117页 |
| 第三章 AHAS催化亚基与调控亚基相互作用的研究 | 第117-132页 |
| 第一节 背景介绍 | 第117页 |
| 第二节 研究目的和实验设计 | 第117-118页 |
| 第三节 实验材料与方法 | 第118页 |
| 第四节 实验结果与讨论 | 第118-131页 |
| ·通过对ilvI进行突变寻找与ilvH相互作用的关键残基 | 第118-121页 |
| ·不含半胱氨酸的催化亚基ilvI'定点突变研究 | 第121-123页 |
| ·蛋白表面扫描标记技术确定催化亚基上亚基间相互作用的位点 | 第123-126页 |
| ·ilvI'半胱氨酸定点突变研究催化亚基的聚集状态 | 第126-131页 |
| 第五节 本章小结 | 第131-132页 |
| 第四章 反应体系对AHAS亚基间相互作用的影响 | 第132-142页 |
| 第一节 背景介绍 | 第132页 |
| 第二节 研究目的与实验计划 | 第132-134页 |
| 第三节 实验材料与实验方法 | 第134页 |
| ·实验试剂 | 第134页 |
| ·实验过程 | 第134页 |
| 第四节 实验结果与讨论 | 第134-140页 |
| ·pH值对AHAS催化活性的影响 | 第134-136页 |
| ·金属离子的种类对AHAS催化活性的影响 | 第136-140页 |
| 第五节 本章小结 | 第140-142页 |
| 第五章 具有激活功能的最小AHAS调控亚基肽段 | 第142-168页 |
| 第一节 背景介绍 | 第142-143页 |
| 第二节 研究目的和实验设计 | 第143-144页 |
| 第三节 实验材料与方法 | 第144-153页 |
| ·截短突变体系的构建 | 第144-150页 |
| ·目的蛋白的表达与可溶性鉴定 | 第150页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第150-151页 |
| ·酶活性的测定 | 第151-152页 |
| ·微量热泳动实验 | 第152-153页 |
| 第四节 实验结果与讨论 | 第153-166页 |
| ·截短突变体质粒的构建结果 | 第153-156页 |
| ·截短突变体蛋白质的纯化结果 | 第156页 |
| ·激活催化亚基的最小调控亚基肽段的确定 | 第156-160页 |
| ·最小激活肽段对不同来源的催化亚基的激活 | 第160-163页 |
| ·最小激活肽段与不同来源的催化亚基的结合 | 第163-166页 |
| 第五节 本章小结 | 第166-168页 |
| 第六章 ACT结构域 | 第168-189页 |
| 第一节 背景介绍 | 第168-170页 |
| 第二节 研究目的和实验计划 | 第170-171页 |
| 第三节 实验材料与实验方法 | 第171-173页 |
| ·二十种编码氨基酸溶液的配制 | 第171页 |
| ·不同氨基酸对AHAS抑制活性的测定 | 第171-172页 |
| ·ACT结构域蛋白的表达与纯化 | 第172-173页 |
| ·本章中用到的计算方法 | 第173页 |
| 第四节 实验结果与实验讨论 | 第173-187页 |
| ·二十种编码氨基酸对AHAS活性的影响 | 第173-178页 |
| ·ACT结构域潜在的调控网络 | 第178-187页 |
| 第五节 本章小结 | 第187-189页 |
| 第七章 全文总结与展望 | 第189-195页 |
| 第一节 全文总结 | 第189-192页 |
| 第二节 课题展望 | 第192-195页 |
| 参考文献 | 第195-208页 |
| 致谢 | 第208-210页 |
| 附录 | 第210-232页 |
| 附录A AHAS催化亚基的序列比对结果 | 第210-221页 |
| 附录B AHAS调控亚基的序列比对结果 | 第221-225页 |
| 附录C ilvH二聚体八分后各部分包含的残基 | 第225-230页 |
| 附录D ilvH晶体结构的表面残基 | 第230-231页 |
| 附录E 产物3-羟基2-丁酮的标准曲线 | 第231-232页 |
| 个人简历 | 第232页 |
| 在学期间发表的学术论文和研究成果 | 第232-233页 |
