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棉花GhWD40基因的克隆及功能验证

摘要第1-8页
Abstract第8-9页
縮写名词表第9-10页
1 前言第10-19页
   ·植物抗逆信号路径的相关研究进展第10-15页
       ·植物盐胁迫下的离子稳态调节第11-12页
     ·植物干旱胁迫下的生理响应调节第12-13页
     ·ABA参与植物抗逆信号路径研究第13-15页
       ·ABA的生物合成第14页
       ·ABA与渗透胁迫信号路径第14-15页
       ·依赖ABA和不依赖ABA信号路径第15页
   ·植物WD40蛋白的研究进展第15-18页
     ·植物中WD40蛋白的定义和结构体系第15-16页
     ·WD40蛋白在植物和细胞发育中的多样性作用第16-17页
     ·WD40蛋白在非生物逆境胁迫中的作用第17-18页
   ·作物抗逆基因工程的研究进展第18-19页
   ·课题研究的目的与意义第19页
2 材料与方法第19-28页
   ·实验材料第19-20页
     ·植物材料第19-20页
     ·菌株和表达载体第20页
     ·实验主要试剂第20页
   ·实验方法第20-28页
     ·GhWD40基因的克隆第20-21页
     ·构建植物表达载体第21-23页
       ·超量表达载体的构建第21-22页
       ·抑制表达载体的构建第22-23页
     ·GhWD40的生物学信息学分析方法第23页
     ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化及转基因纯系的鉴定第23页
       ·拟南芥的转化方法第23页
       ·转基因拟南芥T1、T2代的筛选及鉴定第23页
     ·农杆菌介导的棉花下胚轴遗传转化方法第23页
     ·棉花组织DNA的提取第23-24页
       ·DNA的抽提和纯化第23页
       ·DNA浓度的测定第23-24页
     ·植物组织RNA的提取、纯化及反转录过程第24-25页
     ·Realtime PCR分析GhWD40的表达模式第25页
     ·转基因拟南芥中GhWD40及抗逆相关基因的表达分析第25-26页
     ·转基因拟南芥在逆境处理下的生理鉴定第26-28页
       ·转基因拟南芥的非生物逆境处理第26-27页
       ·转基因拟南芥非生物逆境与ABA处理下幼苗根长的测定方法第27页
       ·转基因拟南芥植株的非生物逆境处理与鉴定第27页
       ·GhWD40转基因拟南芥水分散失、酶活和丙二醛的含量测定方法第27-28页
     ·RNAi棉花GhWD40在过氧化氢、盐处理下的表型鉴定第28页
3 结果与分析第28-43页
   ·棉花EST(DT550041)受多种非生物逆境胁迫诱导表达第28-29页
   ·GhWD40基因序列的生物信息学分析结果第29-31页
   ·GhWD40基因在棉花中的组织表达模式分析第31页
   ·超表达GhWD40在拟南芥中的功能分析第31-43页
     ·转基因拟南芥的鉴定第31-32页
     ·超表达GhWD40提高了拟南芥对NaCl的敏感性第32-35页
       ·超表达GhWD40增强了种子萌发对NaCl的敏感性第32页
       ·超表达GhWD40使幼苗生长对NaCl的耐受性降低第32-33页
       ·盐胁迫路径相关基因的表达分析结果第33-35页
     ·超表达GhWD40拟南芥对干旱的耐受性降低第35-38页
       ·超表达GhWD40的拟南芥在种子萌发期对甘露醇的敏感性提高第35页
       ·超表达GhWD40在成熟幼苗生长期对干旱的耐受性降低第35-37页
       ·干旱胁迫路径相关基因的表达分析结果第37-38页
     ·超表达GhWD40在拟南芥中提高了植物对ABA的敏感度第38-41页
       ·GhWD40超表达转基因拟南芥种子萌发时对ABA更敏感第38-39页
       ·GhWD40超表达转基因拟南芥的主根对外源ABA处理敏感性降低第39-41页
       ·ABA路径相关基因的表达分析第41页
   ·GhWD40在棉花抗逆中的功能鉴定第41-43页
     ·GhWD40转基因沉默棉花TO植株的Southern blot检测第41-42页
     ·GhWD40转基因沉默棉花的目标基因表达量检测第42-43页
     ·RNAi转基因棉花GhWD40在H202和NaCl处理下的表型分析第43页
4 分析与讨论第43-48页
   ·GhWD40是从棉花中克隆得到一个新的WD40家族类基因第43-44页
   ·GhWD40在植物盐和干旱胁迫过程中的负调控作用第44-46页
   ·超表达GhWD40拟南芥参与ABA信号转导路径的调控作用第46-47页
   ·RNAi转基因棉花GhWD40对H_2O_2和NaCl无明显差异第47页
   ·下一步的工作计划第47-48页
参考文献第48-62页
致谢第62页

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