| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 第一部分 靶向调控TGFA microRNA的预测及筛选 | 第15-29页 |
| ·引言 | 第15-16页 |
| ·实验材料 | 第16-18页 |
| ·细胞 | 第16页 |
| ·患者临床资料 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| ·细胞培养 | 第18页 |
| ·细胞的冻存、复苏和细胞计数 | 第18-19页 |
| ·QPCR检测miRNAs和TGFA mRNA的表达 | 第19-22页 |
| ·统计学分析 | 第22页 |
| ·实验结果 | 第22-26页 |
| ·TGFA靶miRNA的预测结果 | 第22-23页 |
| ·组织标本中miR-376c的表达差异 | 第23页 |
| ·组织标本中TGFA mRNA的表达差异 | 第23-24页 |
| ·miR-376c和TGFA在正常骨骼肌组织与骨肉瘤组织中的表达相关性 | 第24-25页 |
| ·骨肉瘤细胞中miR-376c的表达差异 | 第25页 |
| ·骨肉瘤细胞中TGFA mRNA的表达差异 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| ·结论 | 第28-29页 |
| 第二部分 miR-376c靶向抑制TGFA的表达 | 第29-52页 |
| ·引言 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·试剂 | 第30-31页 |
| ·主要设备 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-42页 |
| ·QPCR | 第32页 |
| ·Western Blot | 第32-34页 |
| ·脂质体转染 | 第34-35页 |
| ·双荧光素酶报告基因方法 | 第35-41页 |
| ·统计学方法 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-48页 |
| ·miR-376c mimics脂质体转染Saos-2细胞表达效率检测 | 第42页 |
| ·过表达miR-376c对TGFA蛋白表达效率的影响 | 第42-43页 |
| ·过表达miR-376c对EGFR蛋白表达效率的影响 | 第43-44页 |
| ·转染TGFA ORF克隆对Saos-2细胞中TGFA蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
| ·过表达TGFA回复Saos-2细胞中TGFA蛋白表达水平 | 第45-46页 |
| ·过表达TGFA回复Saos-2细胞中EGFR蛋白表达水平 | 第46-47页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测miR-376c靶向调控TGFA | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| ·结论 | 第51-52页 |
| 第三部分 miR-376c对骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响 | 第52-76页 |
| ·引言 | 第52-53页 |
| ·实验材料 | 第53-57页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·细胞株 | 第54页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·病毒载体 | 第54-56页 |
| ·仪器 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-66页 |
| ·pri-miR-376c表达载体的构建 | 第57-60页 |
| ·miR-376c慢病毒包装 | 第60-64页 |
| ·QPCR检测方法 | 第64-65页 |
| ·Western blot检测方法 | 第65页 |
| ·CCK-8检测方法 | 第65页 |
| ·Transwell检测方法 | 第65页 |
| ·统计学方法 | 第65-66页 |
| ·实验结果 | 第66-73页 |
| ·miR-376c慢病毒载体构建及鉴定 | 第66-68页 |
| ·骨肉瘤Saos-2细胞慢病毒感染效率 | 第68页 |
| ·miR-376c慢病毒感染骨肉瘤Saos-2细胞表达效率检测 | 第68-69页 |
| ·miR-376c对骨肉瘤细胞Saos-2细胞生长曲线的影响 | 第69页 |
| ·MiR-376c对骨肉瘤细胞Saos-2侵袭能力的影响 | 第69-70页 |
| ·过表达TGFA回复miR-376c对Saos-2细胞增殖能力抑制的影响 | 第70-71页 |
| ·过表达TGFA回复miR-376c对Saos-2细胞侵袭转移能力抑制的影响 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 综述 | 第81-103页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 攻读学位期间主要成果和获奖情况 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
