| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| ·使用锌指核酸酶的基因打靶 | 第10-16页 |
| ·ZFN 的发展 | 第11-12页 |
| ·ZFN 在模式生物中的应用 | 第12页 |
| ·ZFN 在人类干细胞中研究 | 第12-14页 |
| ·ZFN 介导的 SCID 基因的基因打靶 | 第14页 |
| ·毒性和其他不希望的影响 | 第14-15页 |
| ·未来方向 | 第15-16页 |
| ·重组慢病毒用于基因转移和表达 | 第16-18页 |
| ·新的整合酶缺陷慢病毒载体用于转基因 | 第16-17页 |
| ·慢病毒生产过程 | 第17-18页 |
| ·运用 IDLV 分析 ZFN 打靶特异性 | 第18-23页 |
| ·IDLV 捕获 DNA 双链断裂位点 | 第19-20页 |
| ·ZFN 打靶位点周围的 IDLV 整合簇 | 第20页 |
| ·CLIS 分析鉴定打靶和脱靶的 ZFN 作用位点 | 第20-21页 |
| ·计算机分析 ZFN 脱靶活力 | 第21-22页 |
| ·验证脱靶活力 | 第22-23页 |
| 第二章 具有 NEO（新霉素）抗性的整合酶缺失慢病毒载体的构建 | 第23-32页 |
| ·实验材料和方法 | 第23-27页 |
| ·试剂和设备 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·实验结果 | 第27-31页 |
| ·设计携带 Xba I 和 Bam HI 的引物 PCR neo 基因 | 第27-28页 |
| ·Neo 胶回收 | 第28页 |
| ·Neo AT 连接后单克隆单酶切双酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·PLVX 9000bp 双酶切胶回收 | 第29页 |
| ·Neo，plvx 连接载体单克隆双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·鉴定出的 Neo，plvx 连接载体扩大培养去内毒素提质粒 | 第30页 |
| ·构建的载体图 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第三章 IDLV 转染 ZFN 处理过的细胞 | 第32-40页 |
| ·实验材料和方法 | 第32-37页 |
| ·试剂和设备 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-37页 |
| ·实验结果 | 第37-39页 |
| ·293T 包装病毒 | 第37页 |
| ·包装的病毒转染胎牛成纤维 | 第37-38页 |
| ·单克隆细胞 | 第38页 |
| ·稳定整合后的共转和单转细胞过流式细胞仪检测整合效率 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39页 |
| ·实验小结 | 第39-40页 |
| 第四章 脱靶热点簇整合位点分析 | 第40-48页 |
| ·实验材料和方法 | 第40-43页 |
| ·实验材料和设备 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·实验结果 | 第43-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·实验小结 | 第47-48页 |
| 第五章 阳性细胞克隆脱靶位点检测 | 第48-55页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·阳性细胞克隆靶位点检测(Southern blot) | 第49-51页 |
| ·实验结果 | 第51页 |
| ·阳性细胞克隆脱靶位点检测 | 第51-54页 |
| ·讨论 | 第54页 |
| ·实验小结 | 第54-55页 |
| 全文结论 | 第55-56页 |
| 创新之处和不足之处 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
