| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 绪论 | 第8-17页 |
| ·喜树简介 | 第8-9页 |
| ·喜树碱 | 第9-16页 |
| ·喜树碱的分布规律 | 第9-10页 |
| ·喜树碱的生物合成途径 | 第10-11页 |
| ·喜树碱的生物合成途径中的关键酶 | 第11-14页 |
| ·喜树碱的理化特性 | 第14页 |
| ·喜树碱的药用价值 | 第14-15页 |
| ·喜树碱的提取与测定方法 | 第15-16页 |
| ·立题依据及目的意义 | 第16-17页 |
| 2 喜树tdc1基因的克隆与序列分析 | 第17-32页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·实验仪器设备 | 第17页 |
| ·主要实验药品的配制 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-24页 |
| ·喜树幼苗总RNA提取 | 第18-19页 |
| ·反转录合成cDNA | 第19-20页 |
| ·目的基因片段的PCR扩增与回收 | 第20-21页 |
| ·特异PCR片段与载体连接 | 第21页 |
| ·质粒DNA的转化、菌落PCR鉴定与质粒提取 | 第21-23页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第23页 |
| ·目的片段的测序及序列对比分析 | 第23-24页 |
| ·实验结果 | 第24-31页 |
| ·喜树总RNA的检测和tdc1基因的PCR扩增 | 第24页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第24页 |
| ·pMD18-T-tdc1重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·目的片段的测序及对比分析 | 第25-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 3 喜树tdc1基因的原核表达及蛋白纯化 | 第32-38页 |
| ·实验材料与方法 | 第32-34页 |
| ·主要实验药品的配制 | 第32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·蛋白质小量表达 | 第33页 |
| ·蛋白质大量原核表达 | 第33页 |
| ·蛋白破碎及纯化 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第34页 |
| ·实验结果 | 第34-37页 |
| ·重组质粒目的片段扩增、回收后双酶切结果 | 第34-35页 |
| ·表达载体的菌落PCR鉴定 | 第35页 |
| ·两种重组表达载体原核表达结果 | 第35-36页 |
| ·蛋白质纯化 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 4 喜树种子萌发过程中喜树碱含量与tdc1表达情况的对应关系 | 第38-44页 |
| ·微量样品中喜树碱含量的高效液相色谱测定 | 第38-40页 |
| ·仪器、材料与试药 | 第38页 |
| ·方法与结果 | 第38-40页 |
| ·喜树种子萌发过程中喜树碱含量的变化 | 第40页 |
| ·喜树种子萌发过程中tdc1表达情况 | 第40-41页 |
| ·喜树种子的萌发、采样与总RNA提取 | 第40页 |
| ·反转录PCR | 第40页 |
| ·Real-time PCR测定tdc1表达情况 | 第40-41页 |
| ·数据分析处理 | 第41页 |
| ·实验结果 | 第41-42页 |
| ·喜树种子萌发过程中喜树碱含量的变化 | 第41-42页 |
| ·tdc1表达量随喜树种子萌发过程的变化 | 第42页 |
| ·本章小结 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-53页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-56页 |