水稻几丁质酶定向进化
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 1 前言 | 第8-13页 |
| ·植物几丁质酶特性 | 第8-9页 |
| ·植物几丁质酶的分类 | 第9页 |
| ·植物几丁质酶基因研究进展 | 第9-11页 |
| ·几丁质酶新发现 | 第9-10页 |
| ·几丁质酶 N-端研究 | 第10-11页 |
| ·几丁酶农业上应用 | 第11页 |
| ·问题与展望 | 第11-13页 |
| 2 定向进化 | 第13-19页 |
| ·易错 PCR | 第14页 |
| ·DNA 改组 | 第14-15页 |
| ·筛选方法 | 第15-16页 |
| ·定向进化的应用 | 第16-17页 |
| ·工业领域研究 | 第16页 |
| ·药用蛋白领域研究 | 第16-17页 |
| ·农业领域研究 | 第17页 |
| ·定向进化应用前景 | 第17-18页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 3 目的基因的体外突变及克隆 | 第19-30页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·质粒 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-23页 |
| ·几丁质酶基因突变及筛选文库的构建 | 第20-21页 |
| ·质粒提取 | 第20页 |
| ·水稻几丁质酶基因 chAB 的扩增 | 第20页 |
| ·目的基因纯化回收 | 第20-21页 |
| ·易错 PCR | 第21页 |
| ·DNA 改组(DNA shuffling) | 第21页 |
| ·突变文库的构建 | 第21-23页 |
| ·新鲜感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·限制性酶切 | 第22页 |
| ·连接 | 第22页 |
| ·转化 | 第22-23页 |
| ·筛选 | 第23页 |
| ·序列分析 | 第23页 |
| ·结果分析 | 第23-28页 |
| ·质粒提取及 PCR 鉴定 | 第23-24页 |
| ·体外突变 | 第24-26页 |
| ·易错 PCR 结果 | 第24页 |
| ·DNA shuffling 结果 | 第24-26页 |
| ·突变文库鉴定 | 第26页 |
| ·序列分析结果 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| ·易错 PCR | 第28页 |
| ·DNA shuffling | 第28-29页 |
| ·突变表达载体构建及筛选 | 第29-30页 |
| 4 重组菌的诱导表达及酶活力测定 | 第30-47页 |
| ·材料及试剂 | 第30-31页 |
| ·菌种 | 第30页 |
| ·主要试剂与溶液 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·胶体几丁质的制备 | 第31页 |
| ·DNS 的配制 | 第31页 |
| ·考马斯亮蓝 G-250 的配置 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·几丁质酶活测定 | 第32-33页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第33-34页 |
| ·蛋白含量标准曲线的绘制 | 第33-34页 |
| ·可溶性蛋白含量测定 | 第34页 |
| ·菌体沉淀 SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第34-35页 |
| ·CHA-P 突变体的诱导表达 | 第35-37页 |
| ·CHA-P 突变体表达条件优化 | 第36-37页 |
| ·包涵体复性 | 第37-38页 |
| ·包涵体的溶解 | 第37-38页 |
| ·包涵体复性 | 第38页 |
| ·结果分析 | 第38-44页 |
| ·突变体 CHA-P 诱导表达结果 | 第38-40页 |
| ·CHA-P 突变体表达条件的正交优化 | 第40-43页 |
| ·包涵体复性结果 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| ·突变体 CHA-P 的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·表达条件优化 | 第45页 |
| ·可能形成的包涵体原因 | 第45页 |
| ·包涵体的处理及复性 | 第45-47页 |
| 5 小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
