大熊猫隐孢子虫分离鉴定及其种系发育研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 文献综述 | 第12-29页 |
| 1 隐孢子虫概况 | 第12-13页 |
| 2 隐孢子虫的分类学和遗传多态性 | 第13-18页 |
| ·寄生哺乳动物隐孢子虫 | 第15-16页 |
| ·寄生于胃的隐孢子虫 | 第15页 |
| ·寄生于肠道的隐孢子虫 | 第15-16页 |
| ·寄生鸟类隐孢子虫 | 第16-17页 |
| ·寄生爬行动物隐孢子虫 | 第17-18页 |
| ·寄生两栖动物隐孢子虫 | 第18页 |
| ·寄生鱼类隐孢子虫 | 第18页 |
| 3 隐孢子虫基因亚型 | 第18-23页 |
| 4 野生胎盘哺乳动物隐孢子虫有效种和基因型 | 第23-25页 |
| 5 大熊猫寄生虫研究进展 | 第25-29页 |
| ·大熊猫的概况 | 第25-26页 |
| ·大熊猫寄生虫研究状况 | 第26-29页 |
| ·大熊猫常见寄生虫 | 第26-27页 |
| ·大熊猫常见寄生虫的检查与防治 | 第27-29页 |
| 实验一 碧峰峡大熊猫肠道寄生虫调查 | 第29-32页 |
| 1 材料和方法 | 第29-30页 |
| ·粪便样品采集 | 第29页 |
| ·检查方法 | 第29-30页 |
| ·饱和蔗糖溶液配制 | 第29页 |
| ·饱和蔗糖溶液漂浮法 | 第29-30页 |
| ·判定标准 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-31页 |
| ·检测结果 | 第30页 |
| ·感染率 | 第30-31页 |
| 3 分析与讨论 | 第31-32页 |
| ·检测方法优缺性 | 第31页 |
| ·与野生大熊猫感染差异性 | 第31页 |
| ·圈养大熊猫寄生虫感染原因分析 | 第31-32页 |
| 实验二 大熊猫隐孢子虫生物学特性研究 | 第32-38页 |
| 1 材料和方法 | 第32-34页 |
| ·粪便样品采集 | 第32-33页 |
| ·主要试剂配制 | 第33页 |
| ·检查方法 | 第33页 |
| ·判定标准 | 第33页 |
| ·卵囊初步纯化收集 | 第33页 |
| ·改良抗酸染色检测 | 第33-34页 |
| ·卵囊形态观察测量 | 第34页 |
| 2 卵囊检测结果 | 第34-36页 |
| ·大熊猫隐孢子虫卵囊的排泄规律 | 第34-35页 |
| ·卵囊形态特征 | 第35-36页 |
| 3 分析与讨论 | 第36-38页 |
| ·隐孢子虫感染率相对较低 | 第36页 |
| ·隐孢子虫颜色特殊性 | 第36页 |
| ·卵囊大小和排卵囊量的差异性 | 第36-37页 |
| ·大熊猫隐孢子虫感染可能具有宿主特异性 | 第37-38页 |
| 实验三 大熊猫隐孢子虫分离株的基因特性研究 | 第38-68页 |
| 实验主要器材 | 第39页 |
| 实验主要试剂 | 第39-40页 |
| 1 材料和方法 | 第40-50页 |
| ·大熊猫的隐孢子虫样品 | 第40页 |
| ·卵囊收集 | 第40页 |
| ·卵囊样品简单纯化处理 | 第40页 |
| ·卵囊DNA提取 | 第40-42页 |
| ·PCR扩增 | 第42-45页 |
| ·隐孢子虫PCR引物 | 第42页 |
| ·PCR反应体系(25μL)及反应条件 | 第42-44页 |
| ·PCR扩增产物检测 | 第44页 |
| ·PCR扩增产物结果 | 第44-45页 |
| ·各位点PCR产物测序 | 第45页 |
| ·actin位点克隆 | 第45-49页 |
| ·PCR扩增actin位点 | 第45-46页 |
| ·actin引物序列 | 第45页 |
| ·actin反应体系(25μL)及反应条件 | 第45-46页 |
| ·PCR扩增产物检测 | 第46页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第46-47页 |
| ·PCR产物回收纯化试剂盒 | 第46页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第46-47页 |
| ·PCR产物回收结果检测 | 第47页 |
| ·actin的PCR产物克隆 | 第47-48页 |
| ·actin克隆试剂及体系 | 第47-48页 |
| ·actin克隆步骤 | 第48页 |
| ·actin克隆结果鉴定 | 第48-49页 |
| ·克隆结果检测所需引物及反应条件 | 第48页 |
| ·对菌液PCR扩增 | 第48页 |
| ·PCR产物检测 | 第48页 |
| ·PCR产物检测结果 | 第48-49页 |
| ·阳性菌液测序 | 第49页 |
| ·18S rRNA位点PCR-RFLP | 第49-50页 |
| 2 结果 | 第50页 |
| 3 分析 | 第50-64页 |
| ·种系发育分析软件 | 第50-51页 |
| ·18S rRNA位点种系发育分析 | 第51-54页 |
| ·18S rRNA下载的参考序列 | 第51页 |
| ·大熊猫隐孢子虫的18S rRNA序列发育分析 | 第51-53页 |
| ·18S rRNA同源性分析 | 第53-54页 |
| ·HSP70序列发育分析 | 第54-56页 |
| ·HSP70下载的参考序列 | 第54页 |
| ·HSP70种系发育分析 | 第54-55页 |
| ·HSP70同源性分析 | 第55-56页 |
| ·COWP序列发育分析 | 第56-58页 |
| ·COWP下载的参考序列 | 第56-57页 |
| ·COWP种系发育分析 | 第57-58页 |
| ·COWP同源性分析 | 第58页 |
| ·actin序列发育分析 | 第58-61页 |
| ·actin下载的参考序列 | 第58-59页 |
| ·actin种系发育分析 | 第59页 |
| ·actin同源性分析 | 第59-61页 |
| ·大熊猫隐孢子虫与熊基因型序列差异 | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| ·大熊猫源隐孢子虫为一新的基因型即大熊猫基因型 | 第64-66页 |
| ·大熊猫隐孢子虫分离株为一新的基因型 | 第64页 |
| ·宿主适应性支持隐孢子虫大熊猫基因型 | 第64-65页 |
| ·序列差异性支持大熊猫基因型的成立 | 第65页 |
| ·同源性分析支持大熊猫基因型的不同分类地位 | 第65页 |
| ·限制性片段长度支持大熊猫基因型的不同分类地位 | 第65-66页 |
| ·隐孢子虫大熊猫基因型具有潜在的公共卫生意义 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
