| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 符号和缩写说明 | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-41页 |
| ·假单胞菌简介 | 第13-15页 |
| ·致病性铜绿假单胞菌 | 第13-14页 |
| ·生防假单胞菌 | 第14-15页 |
| ·假单胞菌中吩嗪化合物的合成 | 第15-20页 |
| ·致病性假单胞菌中吩嗪化合物的种类及作用机制 | 第17-18页 |
| ·生防假单胞菌中吩嗪化合物的种类及作用机制 | 第18-19页 |
| ·吩嗪化合物 PCA 及 PYO 的合成通路及相关蛋白特征 | 第19-20页 |
| ·吩嗪化合物的调控因子介绍 | 第20-26页 |
| ·菌群传感系统 Quorum Sensing（QS） | 第21-22页 |
| ·双组分 GacA/GacS 系统和小 RNA RsmXYZ | 第22-23页 |
| ·磷酸转移酶(PTS)系统 | 第23-25页 |
| ·Sigma 因子 | 第25-26页 |
| ·Lon 蛋白酶 | 第26页 |
| ·厌氧调控子 ANR | 第26页 |
| ·碳源代谢抑制系统(CCR)介绍 | 第26-39页 |
| ·模式细菌大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中碳源代谢抑制 CCR 概述 | 第27-30页 |
| ·假单胞菌中的碳源代谢抑制系统 | 第30-32页 |
| ·假单胞菌中 PTS-糖转运系统和 cAMP-CRP 对 CCR 没有关键作用 | 第32-33页 |
| ·假单胞菌中碳源代谢抑制系统的调控网络 | 第33-39页 |
| ·Crc 调控蛋白介绍 | 第33-36页 |
| ·Crc 调控蛋白的功能 | 第36-37页 |
| ·Crc 蛋白调控的分子机制 | 第37-39页 |
| ·本课题研究目的、内容及意义 | 第39-41页 |
| 第二章 材料和方法 | 第41-58页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·菌株培养和保藏条件 | 第41-42页 |
| ·抗生素储备液及使用浓度 | 第42页 |
| ·DNA 常规操作技术 | 第42-46页 |
| ·质粒微量抽提（碱裂解法） | 第42-43页 |
| ·CTAB 法抽提细菌基因组 DNA | 第43页 |
| ·标准 PCR 反应 | 第43-44页 |
| ·基于限制性内切酶和连接酶的质粒构建 | 第44-45页 |
| ·定点突变 | 第45-46页 |
| ·常用缓冲液配方 | 第46-48页 |
| ·PCA 和 PYO 的定量分析 | 第48页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的测定 | 第48-50页 |
| ·大肠杆菌和假单胞菌感受态细胞的制备转化 | 第50页 |
| ·假单胞菌的抑制真菌测定 | 第50页 |
| ·假单胞菌和大肠杆菌高效接合转移方法 | 第50-51页 |
| ·细菌中总 RNA 的提取 | 第51-52页 |
| ·DNase 处理 RNA 样品 | 第52页 |
| ·RNA 反转录成 cDNA | 第52-53页 |
| ·5'-RACE 法确定基因转录起始位点 | 第53-55页 |
| ·Ni-NTA 树脂再生制备 | 第55-56页 |
| ·蛋白质浓度测定(Bradford 法) | 第56-57页 |
| ·TCA 沉淀法浓缩蛋白样品 | 第57-58页 |
| 第三章 假单胞菌中磷酸转移酶基因 ptsP 的鉴定和功能研究 | 第58-64页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-60页 |
| ·菌株和质粒 | 第58-59页 |
| ·ptsP 基因的克隆和测序 | 第59页 |
| ·ptsP 突变株 M18PP 的构建 | 第59-60页 |
| ·β -半乳糖苷酶活性的测定 | 第60页 |
| ·吩嗪-1-羧酸(PCA)和绿脓菌素(PYO)的测定 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-63页 |
| ·ptsP 基因的 PCR 克隆和测序 | 第60页 |
| ·M18 中 ptsP 基因突变株 M18PP 的构建 | 第60-61页 |
| ·ptsP 基因突变导致绿脓菌素（pyocyanin）大量增加 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 假单胞菌中甲基转移酶基因 phzM 的基因表达和调控特征研究 | 第64-95页 |
| ·引言 | 第64-65页 |
| ·材料和方法 | 第65-74页 |
| ·菌株和质粒 | 第65-69页 |
| ·M18 和 PAO1 中 phzM 基因突变株的构建 | 第69-70页 |
| ·phzM 基因的 PCR 克隆和测序 | 第70页 |
| ·假单胞菌 M18 和 PAO1 中 phzM 基因的转录起始位点的确定 | 第70-72页 |
| ·phzM‘-’lacZ 翻译融合和转录融合质粒的构建 | 第72页 |
| ·实时荧光定量 PCR（qRT-PCR） | 第72-73页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定及吩嗪化合物 PCA 和 PYO 的测定 | 第73页 |
| ·真菌抑制实验 | 第73-74页 |
| ·序列分析及序列登录号 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-91页 |
| ·假单胞菌M18和PAO1中吩嗪-1-羧酸（PCA）和绿脓菌素（PYO）合成的特征 | 第74-78页 |
| ·假单胞菌 M18 和 PAO1 中 phzM 基因转录起始位点的确定 | 第78-80页 |
| ·phzM 基因的表达特征----具有温度依赖性和菌株特异性 | 第80-84页 |
| ·LasI 在转录水平而 PtsP 在转录和翻译水平上都对 phzM 基因调控 | 第84-88页 |
| ·M18 和 PAO1 中 phzM、lasI 和 ptsP 等基因的荧光定量测定 | 第88-90页 |
| ·用β-半乳糖苷酶活性测定 M18 和 PAO1 中 lasI 和 ptsP 基因活性 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-95页 |
| 第五章 假单胞菌中碳源代谢抑制系统对吩嗪化合物和 phzM 基因的调控 | 第95-126页 |
| ·引言 | 第95-98页 |
| ·材料与方法 | 第98-111页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第98-99页 |
| ·本章所用培养基和生长条件 | 第99-100页 |
| ·假单胞菌 cbrB, rpoN, crcZ 和 crc 基因删除突变株的构建 | 第100-102页 |
| ·phzM‘-’lacZ 融合质粒及 lasR‘-’lacZ 和 qscR‘-’lacZ 融合质粒的构建 | 第102-104页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定及吩嗪产物 PCA 和 PYO 测定 | 第104页 |
| ·蛋白 Crc 的制备 | 第104-107页 |
| ·蛋白-RNA 结合实验 | 第107-111页 |
| ·结果与分析 | 第111-123页 |
| ·琥珀酸对细胞生长和吩嗪产物的影响 | 第111-112页 |
| ·假单胞菌 cbrB-, rpoN-, crcZ-和 crc-各突变株的表型 | 第112-114页 |
| ·碳源代谢调控系统与绿脓菌素合成相关基因间的关系 | 第114-116页 |
| ·Crc 和 CrcZ 区别性地调控绿脓菌素产量和 phzM 基因的表达 | 第116-118页 |
| ·Crc 和 CrcZ 对 phzM 基因的调控依赖于 CA 基序（CA motif） | 第118-121页 |
| ·Crc 对 phzM 基因的抑制是通过结合在 phzM mRNA 5’端的 CA 基序 | 第121-123页 |
| ·讨论 | 第123-126页 |
| 总结与展望 | 第126-127页 |
| 创新点 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-156页 |
| 附录 I 实验所使用的主要仪器及设备 | 第156-158页 |
| 致谢 | 第158-160页 |
| 攻读学位期间（待）发表的学术论文及奖励 | 第160-163页 |
| 附件 | 第163页 |
