| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-26页 |
| ·动物唾液腺分泌的特殊功能组分及其作用机制 | 第13-19页 |
| ·吸血节肢动物 | 第13-15页 |
| ·抗血液凝集分子 | 第13页 |
| ·抗血小板分子 | 第13-14页 |
| ·舒血管分子 | 第14-15页 |
| ·无颌类动物 | 第15-16页 |
| ·抗凝活性因子 | 第15页 |
| ·抗炎活性因子 | 第15页 |
| ·抗肿瘤活性因子 | 第15页 |
| ·多功能活性因子 | 第15-16页 |
| ·氧化还原相关活性因子 | 第16页 |
| ·有毒动物 | 第16-18页 |
| ·毒蛇 | 第16-17页 |
| ·蜘蛛 | 第17-18页 |
| ·吸血蝙蝠 | 第18-19页 |
| ·动物唾液腺功能组分在药用开发中的研究现状与展望 | 第19-21页 |
| ·防治心脑血管疾病的新药 | 第19页 |
| ·抗肿瘤药和镇痛药 | 第19-20页 |
| ·新型降压药和糖尿病药 | 第20页 |
| ·基因工程产品 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| ·目的 | 第21页 |
| ·意义 | 第21-23页 |
| ·参考文献 | 第23-26页 |
| 第2章 日本七鳃鳗唾液腺分泌低含量蛋白的组分鉴定 | 第26-46页 |
| ·研究背景及意义 | 第26-28页 |
| ·研究背景 | 第26-27页 |
| ·生物质谱技术及其检索软件 | 第27页 |
| ·研究意义 | 第27-28页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·SDS-PAGE 溶液配制 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE 电泳胶的配置 | 第29页 |
| ·蛋白质的切胶回收 | 第29-30页 |
| ·蛋白质的酶解 | 第30页 |
| ·质谱测序及数据库检索 | 第30-31页 |
| ·质谱测序结果分析 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-41页 |
| ·唾液腺分泌物的电泳结果 | 第31页 |
| ·数据库查询结果(Mascot Search Results) | 第31-38页 |
| ·多肽段与唾液腺cDNA 文库的比较结果 | 第38-39页 |
| ·未知肽段数据库重新搜索结果(NCBI Blast Results) | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·MALDI-TOF-MS 结果数据库查询分析 | 第41页 |
| ·Mascot 数据库查询结果与唾液腺cDNA 文库比较结果分析 | 第41-42页 |
| ·低含量蛋白成分功能分类 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| ·参考文献 | 第44-46页 |
| 第3章 日本七鳃鳗血清白蛋白及类白蛋白基因家族分子进化与系统发育 | 第46-56页 |
| ·研究背景及意义 | 第46页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47页 |
| ·同源序列比对 | 第47页 |
| ·结构域预测 | 第47页 |
| ·系统发育树的构建 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-54页 |
| ·同源序列比对结果分析 | 第47-48页 |
| ·类白蛋白家族成员的进化分析 | 第48-51页 |
| ·功能结构域预测分析及系统进化 | 第51-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| ·参考文献 | 第55-56页 |
| 第4章 日本七鳃鳗唾液腺分泌新活性氧调节功能基因Romo1的分子克隆、 表达及功能初探 | 第56-110页 |
| ·新活性氧调节基因 Romo1 的研究背景及意义 | 第56-63页 |
| ·新功能基因与活性氧 | 第56-57页 |
| ·新基因 Romo1 的由来 | 第57页 |
| ·新基因 Romo1 基因的功能及作用机制 | 第57-61页 |
| ·诱导细胞内线粒体ROS 的产生 | 第58页 |
| ·参与癌症细胞和正常细胞增殖的过程 | 第58-59页 |
| ·参与复制性衰老 | 第59-60页 |
| ·参与调控细胞的凋亡 | 第60-61页 |
| ·新基因与耐药性的临床应用 | 第61-62页 |
| ·新基因的研究意义 | 第62-63页 |
| ·日本七鳃鳗 Romo1 基因的分子克隆 | 第63-69页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-67页 |
| ·引物设计 | 第64页 |
| ·提取总RNA | 第64-65页 |
| ·逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第65-66页 |
| ·目的片段与载体相连及鉴定 | 第66-67页 |
| ·结果 | 第67-69页 |
| ·日本七鳃鳗唾液腺RNA 提取结果 | 第67-68页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第68页 |
| ·阳性转化子筛选 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69页 |
| ·日本七鳃鳗 Romo1 推导的氨基酸序列生物信息学分析 | 第69-85页 |
| ·数据库和软件 | 第69-70页 |
| ·方法 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-85页 |
| ·蛋白质序列的基本性质分析 | 第70-78页 |
| ·结构域分析 | 第78-79页 |
| ·空间结构预测 | 第79-82页 |
| ·分子进化与系统发育分析 | 第82-85页 |
| ·讨论 | 第85页 |
| ·日本七鳃鳗 Romo1 基因真核融合表达系统的构建、真核转染及活性初探 | 第85-94页 |
| ·材料 | 第85-86页 |
| ·方法 | 第86-90页 |
| ·酶切位点的选择 | 第86页 |
| ·设计引物 | 第86页 |
| ·PCR 扩增 | 第86-87页 |
| ·目的片段和载体的酶切及回收 | 第87页 |
| ·目的片段与载体相连 | 第87-88页 |
| ·转化 | 第88页 |
| ·重组表达菌菌落PCR 及双酶切鉴定 | 第88-89页 |
| ·真核转染 | 第89-90页 |
| ·线粒体染色及亚细胞定位 | 第90页 |
| ·结果 | 第90-93页 |
| ·讨论 | 第93-94页 |
| ·日本七鳃鳗 Romo1 基因原核表达载体的构建及诱导表达 | 第94-101页 |
| ·材料 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-97页 |
| ·酶切位点的选择及引物设计 | 第94-95页 |
| ·PCR 扩增 | 第95页 |
| ·目的片段和载体的酶切及回收 | 第95-96页 |
| ·目的片段与载体连接并转化至宿主菌 | 第96页 |
| ·重组表达菌菌落PCR 及双酶切鉴定 | 第96-97页 |
| ·阳性重组子的诱导表达及SDS 鉴定 | 第97页 |
| ·结果 | 第97-99页 |
| ·讨论 | 第99-101页 |
| ·日本七鳃鳗 Romo1 基因的组织表达 | 第101-107页 |
| ·材料 | 第101页 |
| ·方法 | 第101-104页 |
| ·引物设计 | 第101-102页 |
| ·分离七鳃鳗外周血红细胞和白细胞 | 第102页 |
| ·总RNA 提取 | 第102页 |
| ·RNA 质量检测 | 第102-103页 |
| ·semi-PCR 反应条件 | 第103-104页 |
| ·结果 | 第104-106页 |
| ·各组织样品总 RNA | 第104页 |
| ·各组织样品模板cDNA | 第104页 |
| ·semi-PCR 结果 | 第104-106页 |
| ·讨论 | 第106-107页 |
| ·小结 | 第107-108页 |
| ·参考文献 | 第108-110页 |
| 第5章 日本七鳃鳗唾液腺Grimin 基因的序列分析、分子进化及组织表达 | 第110-129页 |
| ·研究背景及意义 | 第110-111页 |
| ·日本七鳃鳗Grimin 氨基酸序列生物信息学分析 | 第111-122页 |
| ·材料与方法 | 第111页 |
| ·结果 | 第111-122页 |
| ·蛋白质序列的基本性质分析 | 第111-117页 |
| ·结构域分析 | 第117-118页 |
| ·空间结构预测 | 第118-120页 |
| ·分子进化与系统发育分析 | 第120-122页 |
| ·实时荧光定量PCR 法检测Grimin 的表达 | 第122-125页 |
| ·材料 | 第122页 |
| ·方法 | 第122-124页 |
| ·外周血红细胞和白细胞的分离 | 第122页 |
| ·提取总RNA | 第122-123页 |
| ·检测RNA 的浓度 | 第123页 |
| ·实时荧光PCR 法检测目的基因的相对表达量 | 第123-124页 |
| ·结果 | 第124-125页 |
| ·讨论 | 第125-127页 |
| ·小结 | 第127-128页 |
| ·参考文献 | 第128-129页 |
| 第6章 全文总结 | 第129-130页 |
| 本论文的创新点 | 第130-131页 |
| 附录 1 数据库中搜索到已知物种类白蛋白基因家族氨基酸序列(FASTA 格式文件) | 第131-138页 |
| 附录 2 数据库中搜索到已知物种活性氧调节基因家族氨基酸序列(FASTA 格式文件) | 第138-141页 |
| 附录 3 数据库中搜索到已知物种GRIM19 氨基酸序列(FASTA 格式文件) | 第141-143页 |
| 附录 4 pET32a 原核表达图谱 | 第143页 |
| 附录 5 pEGFP-N1 绿色荧光真核表达载体图谱 | 第143-144页 |
| 附录 6 提取日本七鳃鳗共计42 个组织样品RNA 的OD 值 | 第144-146页 |
| 致谢 | 第146页 |
