| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-33页 |
| ·产气荚膜梭菌简介 | 第13-17页 |
| ·产气荚膜梭菌病的流行及防控情况 | 第17-20页 |
| ·α毒素的结构与功能 | 第20-24页 |
| ·ε毒素的结构和功能 | 第24-27页 |
| ·α和ε毒素的国内外研究进展 | 第27-29页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第29-32页 |
| ·本研究技术路线 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-45页 |
| ·材料 | 第33-37页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·主要仪器试剂及来源 | 第33-35页 |
| ·主要试剂的配置 | 第35-37页 |
| ·EB 溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·电泳缓冲液（50×TAE） | 第36页 |
| ·1.0%琼脂糖凝胶的配置 | 第36页 |
| ·产毒素培养基——Gordon 汤 | 第36页 |
| ·Gill 苏木素配制 | 第36页 |
| ·1%伊红酒精溶液配制 | 第36页 |
| ·0.3%过氧甲醇 | 第36页 |
| ·0.05% Tween-20 | 第36页 |
| ·0.01M 柠檬酸盐缓冲液（1000ml 配制） | 第36页 |
| ·5%BSA（牛血清蛋白） | 第36页 |
| ·不同浓度一抗、二抗 | 第36页 |
| ·0.01MPBS(1000ml 配制) | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-45页 |
| ·产气荚膜梭菌α和ε毒素基因的表达 | 第37-44页 |
| ·菌种复活及模板制备 | 第37页 |
| ·α和ε毒素基因的克隆及核苷酸序列测定 | 第37-40页 |
| ·α和ε毒素基因表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·α和ε毒素蛋白的诱导表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·表达蛋白的 Western blot 检测 | 第43-44页 |
| ·蛋白表达含量的测定及菌株毒性的测定 | 第44页 |
| ·产气荚膜梭菌α和ε毒素蛋白免疫保护性的研究 | 第44-45页 |
| ·包涵体粗提物的制备 | 第44页 |
| ·实验动物及处理 | 第44-45页 |
| ·免疫程序 | 第45页 |
| ·ELISA 测定抗体消长规律 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-52页 |
| ·α和ε毒素保护性抗原基因的 PCR 扩增，克隆，序列分析 | 第45-47页 |
| ·α毒素基因的 PCR 扩增、克隆、序列分析 | 第45-46页 |
| ·ε毒素基因的 PCR 扩增、克隆、序列分析 | 第46-47页 |
| ·α毒素和ε毒素基因表达载体的构建 | 第47页 |
| ·α和ε毒素蛋白的高效诱导表达与纯化结果 | 第47-50页 |
| ·α毒素蛋白的高效诱导表达与纯化结果 | 第47-48页 |
| ·ε毒素蛋白的高效诱导表达与纯化结果 | 第48-49页 |
| ·Western blot 结果 | 第49-50页 |
| ·重组菌株毒性的测定结果 | 第50页 |
| ·α毒素抗体效价ELISA测定结果 | 第50-51页 |
| ·ε毒素抗体效价 ELISA 测定结果 | 第51页 |
| ·α和ε毒素抗体效价 ELISA 测定结果 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| ·产气荚膜梭菌病的流行情况和研制疫苗的必要性 | 第52-53页 |
| ·α和ε毒素蛋白的高效表达 | 第53页 |
| ·α和ε毒素蛋白免疫保护性的初步研究 | 第53页 |
| 5 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表论文及奖励 | 第65页 |