| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 抗菌肽研究概况 | 第10-23页 |
| ·抗菌肽在天然免疫系统中作用 | 第10页 |
| ·抗菌肽的分类及其结构 | 第10-16页 |
| ·哺乳动物抗菌肽 | 第11-13页 |
| ·昆虫抗菌肽 | 第13-14页 |
| ·两栖动物抗菌肽 | 第14页 |
| ·植物抗菌肽 | 第14-16页 |
| ·微生物抗菌肽 | 第16页 |
| ·海洋动物抗菌肽 | 第16页 |
| ·常用的抗菌肽数据库 | 第16页 |
| ·抗菌肽基因工程 | 第16-21页 |
| ·常用的抗菌肽表达系统 | 第17-19页 |
| ·抗菌肽表达策略 | 第19-21页 |
| ·抗菌肽SHIVA-1 在转基因动植物上的应用试验研究 | 第21-23页 |
| 第二章 抗菌肽SHIVA-1A 在杆状病毒中的表达及其抑菌活性试验 | 第23-39页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌种、载体、细胞 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·常用溶液和培养基配制 | 第23-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-34页 |
| ·Shiva-1a 基因的获取与重组供体质粒pFastBac Dual-Shiva-1a 的构建 | 第26-29页 |
| ·重组Bacmid 的构建及重组杆状病毒的获取 | 第29-31页 |
| ·Shiva-1a 多肽的表达、鉴定及扩大 | 第31-34页 |
| ·shiva-1a 多肽的抗菌活性检测 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-37页 |
| ·重组转座质粒pFastBac Dual-Shiva-1a 的鉴定 | 第34-35页 |
| ·穿梭质粒的蓝白斑鉴定 | 第35页 |
| ·重组Bacmind DNA 转染昆虫Sf9 细胞 | 第35-36页 |
| ·重组杆状病毒目的基因的PCR 鉴定 | 第36页 |
| ·Western Blot 鉴定蛋白表达结果 | 第36-37页 |
| ·抑菌试验结果 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第三章 SHIVA-1A 淋巴特异性真核表达载体的构建 | 第39-48页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·菌种、载体 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-45页 |
| ·转录和翻译终止序列SV40 ployA 基因克隆 | 第39-40页 |
| ·初级真核双表达载体pEGFP-P 载体的构建 | 第40-41页 |
| ·IL-2 5’调控区域的扩增 | 第41-42页 |
| ·初级淋巴特异性表达载体pEGFP-PI 载体的构建 | 第42页 |
| ·Shiva-1a 基因亚克隆 | 第42-43页 |
| ·初级淋巴特异性抗菌肽表达载体pEGFP-PIS 载体的构建 | 第43-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-47页 |
| ·基因组DNA 提取结果 | 第45页 |
| ·PCR 扩增转录和翻译终止序列及初级真核双表达载体pEGFP-P 鉴定 | 第45页 |
| ·IL-2 5’调控区域PCR 扩增及初级淋巴特异性表达载体pEGFP-PI 鉴定 | 第45-46页 |
| ·Shiva-1a 淋巴特异性表达载体pEGFP-PIS 的构建与鉴定 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第四章 SHIVA-1A 特异性真核表达载体的细胞转染和筛选 | 第48-59页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·细胞 | 第48页 |
| ·主要试剂及配置方法 | 第48-49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-53页 |
| ·重组质粒的提取、纯化和浓度测定 | 第49页 |
| ·细胞培养 | 第49-50页 |
| ·脂质体介导细胞转染 | 第50-51页 |
| ·细胞筛选及单克隆培养 | 第51页 |
| ·阳性克隆的获得、扩大与转移 | 第51-52页 |
| ·阳性细胞鉴定 | 第52-53页 |
| ·结果分析 | 第53-57页 |
| ·山羊胎羊成纤维细胞的原代培养 | 第53页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的生长曲线 | 第53-54页 |
| ·胎儿成纤维细胞系对G418 耐受性分析 | 第54页 |
| ·细胞筛选 | 第54-55页 |
| ·阳性克隆 | 第55-57页 |
| ·阳性细胞克隆的PCR 鉴定 | 第57页 |
| ·核型分析 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 主要缩略词和中英文对照表 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 个人简介 | 第69页 |
