| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| ·肌肉特异性激酶的概述 | 第12-13页 |
| ·肌肉特异性激酶的结构 | 第13-14页 |
| ·肌肉特异性激酶与重症肌无力 | 第14-16页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌系统中表达的因素 | 第16-20页 |
| ·外源基因中密码子的使用 | 第17页 |
| ·表达载体的选择 | 第17-19页 |
| ·mRNA的稳定性 | 第19页 |
| ·培养条件的控制 | 第19-20页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| ·肌肉特异性激酶的国内外研究进展 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-40页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·仪器及设备 | 第23页 |
| ·溶液和试剂的配制 | 第23-26页 |
| ·实验方法 | 第26-40页 |
| ·菌株的培养与保存 | 第26-27页 |
| ·MuSK基因的优化和合成 | 第27-29页 |
| ·MuSK基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·质粒提取 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32-35页 |
| ·pQE30-MuSK/E.coli M15重组工程菌的构建 | 第35页 |
| ·pQE30-MuSK/E.coli M15重组工程菌的诱导表达和蛋白纯化 | 第35-36页 |
| ·MuSK蛋白含量的检测 | 第36-37页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第37-38页 |
| ·pQE30-MuSK/E.coli M15重组工程菌培养条件的初步优化 | 第38-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-51页 |
| ·肌肉特异性激酶基因的扩增和转化 | 第40-42页 |
| ·MuSK基因的PCR扩增 | 第40页 |
| ·重组质粒的构建和pQE30-MuSK/E.coli JM109阳性克隆子的鉴定 | 第40-42页 |
| ·pQE30-MuSK/E.coli M15重组工程菌的构建和鉴定 | 第42页 |
| ·MuSK基因在大肠杆菌中诱导表达的鉴定和纯化 | 第42-44页 |
| ·MuSK蛋白的初始含量 | 第44-45页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第45-48页 |
| ·诱导物IPTG浓度对蛋白表达量的影响 | 第45-46页 |
| ·诱导温度对蛋白表达量的影响 | 第46-47页 |
| ·诱导时间对蛋白表达量的影响 | 第47-48页 |
| ·pQE30-MuSK/E.coli M15重组工程菌培养条件的初步优化 | 第48-51页 |
| ·碳源种类对蛋白表达量的影响 | 第48页 |
| ·氮源种类对蛋白表达量的影响 | 第48-49页 |
| ·培养基pH值对蛋白表达量的影响 | 第49-50页 |
| ·培养温度对蛋白表达量的影响 | 第50-51页 |
| 第四章 讨论 | 第51-57页 |
| ·MuSK重组蛋白表达结果分析及应用 | 第51页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的表达形式 | 第51-53页 |
| ·大肠杆菌表达系统的论述 | 第51-52页 |
| ·外源蛋白以包涵体的形式表达 | 第52页 |
| ·外源蛋白在周质间隙中的表达 | 第52-53页 |
| ·蛋白的纯化 | 第53-55页 |
| ·Ni-NTA金属鳌合层析柱纯化 | 第53-54页 |
| ·影响蛋白纯化结果的因素 | 第54-55页 |
| ·本实验的不足之处和改进想法 | 第55-56页 |
| ·展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66页 |
