茶多酚氧化酶基因的克隆及其工程菌的构建
| 目录 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-42页 |
| ·茶黄素研究进展 | 第14-25页 |
| ·茶黄素基本反应原理 | 第15-17页 |
| ·茶黄素制备技术 | 第17-19页 |
| ·体外酶促氧化合成荼黄素的影响因子 | 第19-21页 |
| ·茶黄素分离纯化技术 | 第21-23页 |
| ·茶黄素的分析方法 | 第23-24页 |
| ·茶黄素工业化生产前景 | 第24-25页 |
| ·多酚氧化酶研究进展 | 第25-30页 |
| ·多酚氧化酶在植物中的分布与定位 | 第26页 |
| ·多酚氧化酶的分子结构特点 | 第26页 |
| ·多酚氧化酶基因的克隆与特性 | 第26-27页 |
| ·多酚氧化酶提取纯化技术发展历程 | 第27-30页 |
| ·蛋白表达系统研究进展 | 第30-40页 |
| ·蛋白表达的一般步骤 | 第31页 |
| ·蛋白表达系统的分类 | 第31页 |
| ·蛋白表达系统的组成 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白表达系统 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白表达的特点 | 第33-35页 |
| ·酵母表达系统 | 第35页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第35-40页 |
| ·研究目的与意义 | 第40-41页 |
| ·研究的技术路线 | 第41-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-65页 |
| ·实验材料 | 第42-49页 |
| ·研究样本材料 | 第42页 |
| ·生化试剂 | 第42页 |
| ·实验引物 | 第42-43页 |
| ·溶液和缓冲液 | 第43-48页 |
| ·培养基及抗生素 | 第48-49页 |
| ·仪器 | 第49-50页 |
| ·软件和网络资源 | 第50-51页 |
| ·试验方法 | 第51-65页 |
| ·茶树基因组的提取与纯化 | 第51-52页 |
| ·茶 PPO 基因克隆 | 第52-55页 |
| ·茶 PPO 基因的生物信息学分析 | 第55-56页 |
| ·原核表达载体的构建与表达 | 第56-58页 |
| ·真核表达载体的构建与表达 | 第58-63页 |
| ·诱导表达产物的检测 | 第63-64页 |
| ·酶活测定 | 第64-65页 |
| 3. 结果与分析 | 第65-84页 |
| ·茶多酚氧化酶基因克隆 | 第65-67页 |
| ·茶树基因组的提取与纯化 | 第65页 |
| ·PCR 扩增 PPO 编码区序列 | 第65-66页 |
| ·阳性转化子筛选 | 第66页 |
| ·PPO 编码区序列测序 | 第66-67页 |
| ·茶多酚氧化酶基因生物信息分析 | 第67-73页 |
| ·迎霜品种茶树亲缘关系预测 | 第67-68页 |
| ·PPO 氨基酸序列 Blast 比对 | 第68页 |
| ·PPO 氨基酸序列理化性质预测 | 第68-69页 |
| ·结构功能域预测 | 第69-70页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第70页 |
| ·蛋白跨膜预测 | 第70-71页 |
| ·导肽形式预测 | 第71-73页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第73-75页 |
| ·重组 PPO 的克隆 | 第73页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第73-74页 |
| ·重组表达载体构建 | 第74页 |
| ·原核诱导表达 | 第74-75页 |
| ·茶多酚氧化酶真核表达载体的构建与表达 | 第75-84页 |
| ·PPO 基因克隆 | 第76-80页 |
| ·重组表达质粒线性化 | 第80页 |
| ·酵母重组阳性转化子的筛选 | 第80-81页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第81-83页 |
| ·工程菌遗传稳定性及表达产物酶活性测定 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-87页 |
| ·茶多酚氧化酶基因表达系统的选择 | 第84-85页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第85页 |
| ·茶多酚氧化酶真核表达优化策略展望 | 第85-87页 |
| 5 结论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第104页 |
