| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-35页 |
| ·细菌表面展示技术及应用的研究进展 | 第13-22页 |
| ·细菌表面展示技术的研究进展 | 第13-19页 |
| ·细菌表面展示体系的组成 | 第14页 |
| ·细菌表面展示系统的种类 | 第14-19页 |
| ·细菌表面展示技术的应用现状 | 第19-22页 |
| ·重组疫苗的开发 | 第20页 |
| ·全细胞催化剂 | 第20-21页 |
| ·环境修复方面的应用 | 第21页 |
| ·展示多肽文库作为筛选工具 | 第21-22页 |
| ·冰核蛋白作为运载蛋白的细菌表面展示体系研究进展 | 第22-25页 |
| ·冰核蛋白概述 | 第22页 |
| ·冰核蛋白的结构和功能 | 第22-23页 |
| ·冰核蛋白在细菌细胞表面展示系统的应用 | 第23-25页 |
| ·乘客蛋白—漆酶的研究进展 | 第25-31页 |
| ·漆酶的性质概述 | 第25-27页 |
| ·漆酶的结构特征 | 第25-26页 |
| ·漆酶的理化特性 | 第26页 |
| ·漆酶的氧化特性 | 第26-27页 |
| ·细菌漆酶的研究进展 | 第27-31页 |
| ·细菌漆酶的种类 | 第27页 |
| ·细菌漆酶的结构特征 | 第27-28页 |
| ·细菌漆酶的突变改造研究 | 第28-29页 |
| ·细菌漆酶的应用 | 第29-31页 |
| ·表面展示宿主菌—恶臭假单胞菌 | 第31-32页 |
| ·细菌表面展示系统存在的问题与展望 | 第32-34页 |
| ·研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-46页 |
| ·实验材料 | 第35-39页 |
| ·质粒 | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-39页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第37页 |
| ·质粒提取,质粒转化,质粒快检所需试剂 | 第37页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所需试剂 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE所需试剂 | 第38页 |
| ·Western Blot所需试剂 | 第38页 |
| ·显微镜观察及流式细胞仪分析所用试剂 | 第38页 |
| ·漆酶活性测定试剂 | 第38-39页 |
| ·漆酶脱色所用试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-46页 |
| ·重组质粒和重组菌株的构建 | 第39-41页 |
| ·wlacD基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌和恶臭假单胞菌质粒的提取 | 第40页 |
| ·DNA体外重组 | 第40页 |
| ·大肠杆菌DH5α的转化 | 第40页 |
| ·恶臭假单胞菌的电转化法 | 第40页 |
| ·大肠杆菌转化子和恶臭假单胞菌转化子的筛选鉴定 | 第40-41页 |
| ·质粒稳定性分析 | 第41页 |
| ·融合蛋白在细菌细胞表面的定位分析 | 第41-43页 |
| ·细胞分级分离 | 第41-42页 |
| ·样品处理及SDS-PAGE电泳 | 第42页 |
| ·抗血清制备程序 | 第42页 |
| ·Western Blot实验 | 第42-43页 |
| ·免疫荧光显微镜镜检实验 | 第43页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第43页 |
| ·全细胞漆酶酶活性的测定 | 第43-44页 |
| ·全细胞漆酶对染料的脱色实验 | 第44页 |
| ·全细胞漆酶对染料的绝对脱色分析实验 | 第44页 |
| ·生长曲线绘制 | 第44页 |
| ·重组菌摇瓶发酵工艺的初步优化 | 第44-45页 |
| ·摇瓶发酵条件的优化 | 第44-45页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第45页 |
| ·培养基的优化 | 第45页 |
| ·分析方法 | 第45页 |
| ·图像处理及统计分析 | 第45-46页 |
| ·图像处理 | 第45页 |
| ·统计分析及绘图 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-64页 |
| ·表面展示质粒载体的构建 | 第46-49页 |
| ·多拷贝串联重复InaQ-N载体片段的获得 | 第46-47页 |
| ·靶蛋白基因wlacD的扩增 | 第47页 |
| ·多拷贝串联重复InaQ-N展示质粒的构建 | 第47-49页 |
| ·重组恶臭假单胞菌的构建 | 第49页 |
| ·靶蛋白—漆酶细胞表面定位分析 | 第49-52页 |
| ·细胞分级分离的SDS-PAGE及Western Blot分析 | 第49-50页 |
| ·免疫荧光显微镜镜检 | 第50-51页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第51-52页 |
| ·载体pMB281,pMB282和pMB283在恶臭假单胞菌的稳定性 | 第52-53页 |
| ·重组菌全细胞漆酶酶活的测定 | 第53页 |
| ·重组菌MB285对染料的脱色效果分析 | 第53-55页 |
| ·两种染料的最大吸收波长λm的确定 | 第53-54页 |
| ·重组菌MB285对两种染料的脱色效果分析 | 第54-55页 |
| ·重组菌MB285发酵条件及培养基的初步优化 | 第55-63页 |
| ·重组菌MB285初始培养条件下的生长曲线和酶活曲线的测定 | 第55-56页 |
| ·重组菌MB285摇瓶发酵条件的优化 | 第56-58页 |
| ·温度对生长量的影响 | 第56-57页 |
| ·初始pH对生长量的影响 | 第57页 |
| ·装液量对生长量的影响 | 第57-58页 |
| ·接种量对生长量的影响 | 第58页 |
| ·重组菌MB285摇瓶发酵种龄的确定 | 第58-59页 |
| ·重组菌MB285摇瓶发酵培养基的优化 | 第59-63页 |
| ·碳源筛选 | 第59-60页 |
| ·氮源筛选 | 第60页 |
| ·培养基的单因素分析 | 第60-61页 |
| ·正交试验优化培养基 | 第61-63页 |
| ·重组菌MB285优化前后的绝对脱色效果分析 | 第63-64页 |
| 4 小结与讨论 | 第64-69页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-69页 |
| ·恶臭假单胞菌表面展示性能的分析 | 第65-66页 |
| ·细菌漆酶对染料的脱色分析 | 第66-67页 |
| ·细菌表面展示工程菌的展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录 | 第83页 |
