| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.近年宠物饲养的发展和存在的问题 | 第10页 |
| 2.干扰素及其研究概况 | 第10-13页 |
| ·干扰素的来源、分类及产生细胞 | 第11-12页 |
| ·干扰素相关基因、蛋白及产生机理 | 第12-13页 |
| 3.干扰素的生物学功能 | 第13-15页 |
| ·抗病毒活性 | 第13-14页 |
| ·抗细胞增殖活性 | 第14页 |
| ·免疫调节活性 | 第14-15页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第15页 |
| 4.干扰素的作用机理 | 第15-19页 |
| ·干扰素的信号转导路径及诱导基因的激活 | 第16-18页 |
| (1) 干扰素受体 | 第16页 |
| (2) JAK、STAT和IRFs | 第16-17页 |
| (3) DNA顺式反应元件 | 第17页 |
| (4) 干扰素信号传导的负调控 | 第17-18页 |
| (5) 病毒及其RNA诱导物 | 第18页 |
| ·干扰素诱导的蛋白 | 第18-19页 |
| (1) PKR蛋白激酶系统 | 第18-19页 |
| (2) 2’-5’寡腺苷酸合成酶和RNase L酶系统 | 第19页 |
| (3) MxA蛋白系统 | 第19页 |
| 5.犬α-干扰素的研究进展 | 第19-20页 |
| 6.家蚕杆状病毒表达系统的研究进展 | 第20-22页 |
| 7.本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 研究内容 | 第23-56页 |
| 第一章 犬α-干扰素基因的克隆及序列分析 | 第23-33页 |
| 1.克隆方案 | 第23页 |
| 2.材料 | 第23-25页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·试剂及主要仪器 | 第23-24页 |
| ·培养基与其它试剂的配制 | 第24-25页 |
| 3.方法 | 第25-29页 |
| ·犬α-干扰素基因克隆的引物设计 | 第25页 |
| ·犬基因组DNA的提取 | 第25页 |
| ·犬α-干扰素成熟蛋白基因的PCR克隆 | 第25-26页 |
| ·PCR产物纯化及回收 | 第26-27页 |
| ·DNA连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞DH5α的制备与转化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的抽提与鉴定 | 第28-29页 |
| ·犬α-干扰素基因的序列测定及分析 | 第29页 |
| 4.结果 | 第29-33页 |
| ·犬α-干扰素成熟蛋白基因的PCR克隆 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·犬α-干扰素基因序列分析 | 第30-33页 |
| 第二章 犬α-干扰素基因在大肠杆菌中的表达 | 第33-40页 |
| 1.表达方案 | 第33页 |
| 2.材料 | 第33-34页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·试剂及主要仪器 | 第33页 |
| ·有关试剂的配制 | 第33-34页 |
| 3.方法 | 第34-37页 |
| ·重组质粒和表达载体的酶切 | 第34-35页 |
| ·DNA连接 | 第35页 |
| ·感受态细胞E.coli BL21的制备与转化 | 第35页 |
| ·重组质粒的抽提与鉴定 | 第35页 |
| ·犬α-干扰素基因的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·表达产物的SDS聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第36-37页 |
| 4.结果 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组基因工程菌的蛋白质电泳 | 第38-39页 |
| 5.讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 犬α-干扰素基因在家蚕中的高效表达 | 第40-54页 |
| 1.表达方案 | 第40页 |
| 2.材料 | 第40-42页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·试剂及主要仪器 | 第40-41页 |
| ·实验动物及细胞 | 第41页 |
| ·有关试剂的配制 | 第41-42页 |
| 3.方法 | 第42-47页 |
| ·重组质粒和表达载体的酶切 | 第42页 |
| ·DNA连接与转化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的抽提与鉴定 | 第43页 |
| ·感受态细胞DH10BmBac E.coli的制备与转座 | 第43页 |
| ·重组Bacmid DNA的抽提与鉴定 | 第43-45页 |
| ·Bacmid DNA转染 | 第45页 |
| ·犬α-干扰素基因在家蚕细胞、昆虫细胞中的表达 | 第45页 |
| ·犬α-干扰素基因在家蚕幼虫中的表达 | 第45-46页 |
| ·表达产物的分析与鉴定 | 第46页 |
| ·重组蛋白的纯化与鉴定 | 第46-47页 |
| 4. 结果 | 第47-52页 |
| ·重组犬α-干扰素病毒的构建与鉴定 | 第47-49页 |
| ·重组犬α-干扰素rCaIFN-α在培养细胞内的表达时相分析 | 第49-52页 |
| ·重组犬α-干扰素rCaIFN-α的纯化及其蛋白鉴定 | 第52页 |
| 5. 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 重组犬α-干扰素的活性分析 | 第54-56页 |
| 1.材料 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·细胞培养主要试剂 | 第54页 |
| 2.方法 | 第54-55页 |
| 3.结果与分析 | 第55-56页 |
| 研究小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录A 论文中缩写词中英文对照 | 第64-65页 |
| 附录B 论文中所用载体图谱 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
