| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·维生素E的结构、分类与活性 | 第12-13页 |
| ·植物体内维生素E的终代谢途径 | 第13-14页 |
| ·植物维生素E基因工程的研究进展 | 第14-17页 |
| ·农杆菌介导的花生遗传转化研究进展 | 第17-21页 |
| ·以农杆菌介导的遗传转化原理 | 第17-18页 |
| ·花生植株再生体系研究进展 | 第18-20页 |
| ·花生基因转化研究进展 | 第20-21页 |
| ·本研究的主要内容与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 维生素E关键酶基因的克隆 | 第22-36页 |
| 1 材料与方法 | 第23-36页 |
| ·植物材料 | 第23-24页 |
| ·菌种与质粒 | 第23页 |
| ·酶和生化试剂 | 第23页 |
| ·所用引物 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-28页 |
| ·拟南芥材料培养及总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·目的基因VE_2、VE_3、Υ-TMT的克隆 | 第25-28页 |
| ·试验结果与分析 | 第28-35页 |
| ·目的基因VE2、VE3、Υ-TMT的克隆结果 | 第28-30页 |
| ·目的基因VE2、VE3、Υ-TMT的测序结果 | 第30-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 维生素E植物特异表达载体的构建 | 第36-55页 |
| 1 材料与方法 | 第36-43页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·菌种与质粒 | 第36-37页 |
| ·酶和生化试剂 | 第37页 |
| ·所用引物 | 第37页 |
| ·试验方法 | 第37-43页 |
| ·DNA片断的酶切反应 | 第37-38页 |
| ·DNA酶切产物的连接反应 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第38-39页 |
| ·重组子的菌落PCR | 第39-40页 |
| ·阳性克隆菌落培养和质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·DNA片断末端平滑化 | 第41页 |
| ·质粒线性化后去磷酸化 | 第41页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备及植物表达载体根癌农杆菌的转化 | 第41-43页 |
| 2 试验结果 | 第43-49页 |
| ·pCAMBIA1300 VE3-2S植物特异表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·pCAMBIA1300 VE2-7S植物特异表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·pCAMBIA1300 Υ-TMT-2S植物特异表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·pcAMBIA1300 AT双价植物特异表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·pCAMBIA1300 VE2-VE3双价植物特异表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-55页 |
| ·种子特异表达启动子的应用 | 第49-50页 |
| ·维生素E基因片断的克隆及分析 | 第50-55页 |
| 第四章 维生素E生物合成关键基因导入花生 | 第55-69页 |
| 1 材料与方法 | 第55-60页 |
| ·试验材料 | 第55-57页 |
| ·植物材料 | 第55-56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·菌株与质粒 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-60页 |
| ·工程菌液的制备 | 第57页 |
| ·外植体的表面消毒 | 第57页 |
| ·基因转化方法 | 第57-58页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第58-59页 |
| ·抗性苗PCR分子鉴定 | 第59-60页 |
| 2 试验结果 | 第60-65页 |
| ·共培养结果 | 第60-61页 |
| ·丛生芽诱导结果 | 第61-62页 |
| ·抗性芽筛选结果 | 第62页 |
| ·抗性芽的伸长与生根结果 | 第62-64页 |
| ·抗性植株PCR检测结果 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-69页 |
| ·抗性芽筛选的潮霉素(HYG)浓度确定 | 第65-66页 |
| ·丛生芽诱导激素浓度的确定 | 第66-67页 |
| ·后续工作 | 第67-69页 |
| 参考文献: | 第69-75页 |
| 附录1:VE2基因的测序结果及载体pCAMBIA1300 VE2-7S的注释 | 第75-82页 |
| 附录2:VE3基因的测序结果及载体pCAMBIA1300 VE3-2S的注释 | 第82-88页 |
| 附录3:Υ-TMT基因的测序结果及载体pCAMBIA1300 Υ-TMT-2S的注释 | 第88-95页 |
| 附录4:载体pCAMBIA1300 VE2-VE3的序列及注释 | 第95-101页 |
| 附录5:载体pCAMBIA1300 AT的序列及注释 | 第101-106页 |
| 附录6:主要化学试剂及缓冲液配制 | 第106-107页 |
| 附录7:常用培养基配方 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
