| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-15页 |
| 第1部分 酵母双杂交技术筛选人白细胞。DNA文库中HCV N54 A结合蛋白 | 第15-35页 |
| ·前言 | 第15页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·实验方法 | 第17-30页 |
| ·诱饵质粒在酵母菌株 AH109中的表达 | 第17-24页 |
| ·诱饵与白细胞文库的酵母配合 | 第24-26页 |
| ·配合效率分析 | 第26页 |
| ·阳性克隆的蓝白筛选 | 第26页 |
| ·提敢酵母质粒 | 第26-27页 |
| ·酵母质粒 PCR | 第27-28页 |
| ·酵母质粒转化大肠杆菌 DH5a及酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·根据测序结果，在 Gen Bank中进行比对分析 | 第29-30页 |
| ·实验结果 | 第30-33页 |
| ·pG召KT7一N54A在酵母菌株 AH109中表达 | 第30页 |
| ·配合效率分析 | 第30-31页 |
| ·在四缺仪一a一gal培养基上生长的真阳性菌落 | 第31页 |
| ·筛选克隆PCR扩增鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·筛选克隆Bgln酶切鉴定结果 | 第32页 |
| ·cDNA测序与同源性分析结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第2部分 cAML塞因及其不同剪接体的克隆及生物信息学分析 | 第35-49页 |
| ·前言 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·cAML基因克隆 | 第35-39页 |
| ·CAML不同剪接体的克隆 | 第39页 |
| ·3 克隆产物生物信息学分析 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-46页 |
| ·CAML基因及其不同剪接体 PCR扩增结果 | 第39-40页 |
| ·CAML及其不同剪接体克隆的酶切鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·测序及生物信息学分析结果 | 第41-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| 第3部分 HCV N54 A与 CAML相互作用的证实 | 第49-60页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·CAML基因酵母表达载体构建 | 第49页 |
| ·pGADT7一cAML转化酵母 Y187菌株 | 第49-50页 |
| ·回交验证实验 | 第50页 |
| ·HCVN54A及 CAML基因真核表达载体构建 | 第50页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第50-54页 |
| ·实验结果 | 第54-57页 |
| ·构建的CAML酵母表达载体 | 第54-55页 |
| ·回交验证实验结果 | 第55-56页 |
| ·构建的HCVN54A基因真核表达载体 | 第56页 |
| ·构建的CAML基因真核表达载体 | 第56-57页 |
| ·免疫共沉淀及westem Blotting检测结果 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| 第4部分 HCV N54A与 CAML相互作用位点的确定 | 第60-68页 |
| ·前言 | 第60页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·CAML基因不同剪接体酵母表达载体构建 | 第60页 |
| ·CAML基因不同缺失突变体酵母表达载体构建 | 第60-61页 |
| ·转化 CAML小同剪接体及缺失哭变体酵母表达载体至酵母 Y187菌株 | 第61页 |
| ·转化 HCVN54A酵母表达载体至酵母 AH109菌株 | 第61页 |
| ·配合试验 | 第61-62页 |
| ·实验结界 | 第62-65页 |
| ·CAML基因不同剪接体酵母表达载体酶切鉴定结果 | 第62页 |
| ·CAML基因不同缺失突变体酵母表达载体酶切鉴定结果 | 第62-63页 |
| ·HCY N54 A酵母表达载体酶切鉴定结果 | 第63页 |
| ·CAML基因不同剪接体与 HCV N54 A在酵母细胞中相互配合结果 | 第63-64页 |
| ·CAML基因不同缺失突变体与HCV N54 A在酵母细胞中相互配合结果 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| 第5部分 应用基由芯片技术探讨 Hcv N54 A与cAML相互作用对细胞基因表达的影响. | 第68-77页 |
| ·前言 | 第68页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-70页 |
| ·CA向L稳定转染细胞株的筛选及建立二 | 第68-69页 |
| ·PCMv胭yc一N54 A转染至pe DNA3.l爪isA一CAMIJ稳定转染细胞株 | 第69页 |
| ·细胞m RNA提取 | 第69页 |
| ·探针标记及杂交 | 第69页 |
| ·检测与分析 | 第69-70页 |
| ·实验结果 | 第70-73页 |
| ·总 RNA及m RNA的定性、定量分析 | 第70页 |
| ·Hc女N53蛋白上调及下调表达基因 | 第70-72页 |
| ·与助。蛋白信号转导相关基因 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 英文缩写词表 | 第83-84页 |
| 文献综述 | 第84-100页 |
| 第1部分 酵母欢杂交系统的原理及研究进展 | 第84-91页 |
| ·酵母双杂交系统基本原理 | 第84-85页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第85-86页 |
| ·酵母双伞交系统的优点 | 第86页 |
| ·酵母双杂交系统的局限性 | 第86-88页 |
| ·酵母双杂交系统的进展 | 第88-90页 |
| ·参考文献 | 第90-91页 |
| 第2部分 钙离子信号调节亲环素配体研究进展 | 第91-100页 |
| ·CAML的生物学特性 | 第91页 |
| ·CAML在钙离子信号转导中的作用 | 第91-94页 |
| ·目前已鉴定的CAML相互作用蛋白 | 第94-97页 |
| ·cAML对病毒感染的意义 | 第97-98页 |
| ·参考文献 | 第98-100页 |
| 博士在读期间发表论文 | 第100-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
