| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-24页 |
| ·植酸酶的研究进展 | 第12-23页 |
| ·植酸酶的来源 | 第12-13页 |
| ·植酸酶的性质 | 第13-15页 |
| ·植酸酶的分类 | 第15-18页 |
| ·植酸酶的研究方向 | 第18-22页 |
| ·植酸酶的应用 | 第22-23页 |
| ·TAIL-PCR技术 | 第23页 |
| ·研究目的意义 | 第23-24页 |
| 第二章 植酸酶基因的克隆 | 第24-46页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·引物合成 | 第24页 |
| ·工具酶、生化试剂及主要仪器 | 第24页 |
| ·培养基和有关试剂、溶液配制 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-32页 |
| ·H.alvei B125、D.dadantii B187、D.paradisiaca B188基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·植酸酶基因部分序列的克隆 | 第25页 |
| ·DNA片段的回收和连接 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·电击转化 | 第26-27页 |
| ·重组子筛选 | 第27页 |
| ·DNA测序 | 第27页 |
| ·植酸酶基因片段的相似性分析 | 第27页 |
| ·H.alvei B125植酸酶基因完整序列的克隆及全基因序列分析 | 第27-28页 |
| ·D.dadantii B187与D.paradisiaca B188植酸酶基因完整序列的克隆及全基因序列分析 | 第28-31页 |
| ·Y.pestis来源植酸酶基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-44页 |
| ·植酸酶基因部分片段的克隆 | 第32页 |
| ·H.alvei B125植酸酶基因完整序列的克隆及全基因序列分析 | 第32-35页 |
| ·D.dadantii B187植酸酶基因完整序列的克隆及全基因序列分析 | 第35-39页 |
| ·D.paradisiaca B188植酸酶基因完整序列的克隆及全基因序列分析 | 第39-42页 |
| ·Y.pestis来源植酸酶基因完整序列的克隆及全基因序列分析 | 第42-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 植酸酶基因的表达及重组蛋白的纯化 | 第46-62页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌株与质粒 | 第46页 |
| ·引物合成 | 第46页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·培养基配制 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-53页 |
| ·原核表达载体pET-22b(+)-B125appA的构建 | 第47页 |
| ·原核表达载体pET-22b(+)-B187appA的构建 | 第47-48页 |
| ·原核表达载体pET-22b(+)-B188appA的构建 | 第48-49页 |
| ·pET-22b(+)-B125appA、pET-22b(+)-B187appA、pET-22b(+)-B188appA在大肠杆菌中的表达及检测 | 第49页 |
| ·大肠杆菌表达的重组植酸酶B125r-APPA、B187r-APPA和B188r-APPA纯化 | 第49-50页 |
| ·真核表达载体pPIC9-ylappA的构建 | 第50-51页 |
| ·pPIC9-ylappA在毕赤酵母中的表达及检测 | 第51-52页 |
| ·毕赤酵母表达重组植酸酶Y1r-APPA的纯化 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-61页 |
| ·pET-22b(+)-B125appA、pET-22b(+)-B187appA和pET-22b(+)-B188appA表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·大肠杆菌中的表达 | 第55-56页 |
| ·重组植酸酶B125r-APPA、B187r-APPA和B188r-APPA纯化 | 第56-60页 |
| ·筛选具有植酸酶活性的转化子 | 第60页 |
| ·重组植酸酶Y1r-APPA的纯化 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 重组植酸酶酶学性质分析 | 第62-77页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·试剂及主要仪器 | 第62页 |
| ·有关试剂和溶液配制 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·最适pH及pH稳定性 | 第62页 |
| ·最适反应温度及热稳定性 | 第62页 |
| ·比活性的测定 | 第62-63页 |
| ·不同化学试剂及金属离子对酶活性的影响 | 第63页 |
| ·反应初速度的测定 | 第63页 |
| ·Km值及Vmax的测定 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-76页 |
| ·B125r-APPA的性质分析 | 第63-67页 |
| ·B187r-APPA的性质分析 | 第67-70页 |
| ·B188r-APPA的性质分析 | 第70-73页 |
| ·Y1r-APPA的性质分析 | 第73-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 第五章 讨论 | 第77-83页 |
| ·植酸酶基因克隆及分析 | 第77-79页 |
| ·设计简并引物获得植酸酶基因部分片段 | 第77页 |
| ·植酸酶基因全长克隆及分析 | 第77-79页 |
| ·植酸酶酶学性质分析 | 第79-83页 |
| 第六章 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 作者简历 | 第92页 |
