| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-23页 |
| ·干扰素的研究进展 | 第9-15页 |
| ·干扰素的分类和基本性质 | 第9-10页 |
| ·干扰素的产生机理 | 第10-11页 |
| ·干扰素的生物学功能 | 第11页 |
| ·干扰素的作用机制 | 第11-12页 |
| ·干扰素-γ | 第12-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第15-23页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第15-16页 |
| ·毕赤酵母的生物学特性 | 第16页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第16-19页 |
| ·宿主菌 | 第19页 |
| ·胞内表达和分泌表达 | 第19页 |
| ·外源蛋白的糖基化 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第20-21页 |
| ·影响外源蛋白表达水平的因素 | 第21-23页 |
| 第2章 引言 | 第23-25页 |
| ·研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| ·研究的主要内容 | 第24页 |
| ·研究的技术路线 | 第24-25页 |
| 第3章 猪γ-干扰素成熟蛋白基因表达片段的克隆及表达载体的构建 | 第25-37页 |
| ·材料与方法 | 第25-32页 |
| ·菌种和质粒载体 | 第25-26页 |
| ·主要化学试剂 | 第26页 |
| ·主要实验仪器 | 第26页 |
| ·主要溶剂及其配制 | 第26-27页 |
| ·引物来源 | 第27页 |
| ·表达载体构建流程图 | 第27-29页 |
| ·猪IFN-γ成熟蛋白基因表达片段的PCR扩增及扩增产物的回收 | 第29页 |
| ·表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| ·携带pPIC9K-POIFN-γ质粒的阳性克隆的筛选 | 第31页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·重组pPIC9K-POIFN-γ质粒的PCR鉴定 | 第32页 |
| ·重组pPIC9K-POIFN-γ质粒的DNA测序 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-35页 |
| ·猪IFN-γ成熟蛋白基因表达片段的PCR扩增及扩增产物的回收 | 第32-33页 |
| ·携带pPIC9K-POIFN-γ质粒的阳性克隆的筛选及鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组pPIC9K-POIFN-γ质粒的DNA测序鉴定 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·猪IFN-γ成熟蛋白基因表达片段扩增的引物设计 | 第35-36页 |
| ·载体pPIC9K-POIFN-γ的构建 | 第36-37页 |
| 第4章 猪Γ干扰素基因在毕赤酵母中的表达与活性测定 | 第37-49页 |
| ·材料与方法 | 第37-44页 |
| ·菌种和质粒载体 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·主要溶剂及其培养基配制 | 第37-39页 |
| ·转化DNA样品的制备 | 第39页 |
| ·毕赤酵母(GS115)原生质体的制备 | 第39-40页 |
| ·毕赤酵母的原生质体转化 | 第40-41页 |
| ·阳性转化子的筛选、表型鉴定、PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·蛋白的表达和SDS-PAGE鉴定 | 第42-43页 |
| ·猪IFN-γ的抗病毒活性测定 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-46页 |
| ·质粒pPIC9K-POIFN-γ和pPIC9K转化与筛选 | 第44页 |
| ·转化毕赤酵母的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组酵母的蛋白表达与SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·猪IFN-γ的抗病毒活性测定 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·重组酵母表达株的筛选 | 第46页 |
| ·影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素 | 第46-47页 |
| ·重组毕赤酵母的蛋白表达 | 第47页 |
| ·重组干扰素PoIFN-γ的抗病毒活性测定 | 第47-49页 |
| 第5章 小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 附录 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
| 发表文章 | 第61页 |
