| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 前言 | 第10-21页 |
| 1 野油菜黄单胞菌概述 | 第10-13页 |
| 2 细菌的分泌机制研究概况 | 第13-16页 |
| 3 W型分泌系统的研究概况 | 第16-19页 |
| 4 W型分泌系统与致病相关性研究进展 | 第19页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第一章 材料与方法 | 第21-35页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第21-22页 |
| ·生化试剂与寄主材料 | 第22页 |
| ·抗生素和其它药剂 | 第22页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·常规试验操作方法 | 第24-30页 |
| ·菌株培养条件及保存 | 第24-25页 |
| ·总DNA的提取 | 第25页 |
| ·DNA的纯化和DNA的沉淀 | 第25页 |
| ·快速碱裂解法少量提取质粒DNA | 第25-26页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段 | 第26-27页 |
| ·PCR反应 | 第27-28页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第28页 |
| ·DNA片段试剂盒回收 | 第28页 |
| ·DNA连接 | 第28页 |
| ·电脉冲感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·CaCl_2法感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·电脉冲转化 | 第29-30页 |
| ·三亲本接合 | 第30页 |
| ·8004△T4SS缺失突变体构建的技术路线 | 第30-31页 |
| ·缺失突变体表型检测方法 | 第31-35页 |
| ·突变体致病相关生化因子的检测 | 第31-32页 |
| ·突变体生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| ·突变体游动性的检测 | 第33页 |
| ·突变体致病性的检测 | 第33-34页 |
| ·突变体β—半乳糖苷酶(GUS)活性的测定 | 第34-35页 |
| 第二章 结果与分析 | 第35-46页 |
| ·构建获得Xcc 8004Ⅳ型分泌系统的缺失突变体(8004AT4SS) | 第35-39页 |
| ·扩增获得目标同源片段 | 第35-36页 |
| ·DNA连接获得重组质粒 | 第36-38页 |
| ·三亲本接合获得缺失突变体 | 第38页 |
| ·缺失突变体8004△T4SS的验证 | 第38-39页 |
| ·缺失突变体8004△T4SS的表型分析 | 第39-46页 |
| ·T4SS的缺失对致病相关生化因子的影响 | 第39-41页 |
| ·T4SS的缺失对生长的影响 | 第41-42页 |
| ·T4SS的缺失对游动性的影响 | 第42-43页 |
| ·T4SS的缺失对致病性的影响 | 第43-45页 |
| ·基本培养基对T4SS结构基因表达的影响 | 第45-46页 |
| 第三章 讨论 | 第46-49页 |
| ·关于突变体的构建方法 | 第46页 |
| ·关于8004Ⅳ型分泌系统缺失突变体的构建 | 第46-47页 |
| ·关于Ⅳ型分泌系统与致病性 | 第47-48页 |
| ·关于Ⅳ型分泌系统的功能 | 第48-49页 |
| 第四章 结论 | 第49-50页 |
| ·Xcc 8004Ⅳ型分泌系统缺失突变体的构建策略 | 第49页 |
| ·Ⅳ型分泌系统与有关性状的关系 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第56页 |