| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| ·纤维素酶的分类和特征 | 第11-12页 |
| ·纤维素酶合成的调控 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶基因克隆表达的研究现状 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶在大肠杆菌中的表达 | 第13页 |
| ·纤维素酶在酿酒酵母中的表达 | 第13-14页 |
| ·酿酒酵母作为外源真核基因表达系统的优势 | 第14页 |
| ·酵母细胞的转化方法 | 第14-15页 |
| ·酵母的表达载体 | 第15-16页 |
| ·构建产纤维素酶工程菌的意义 | 第16-19页 |
| ·在大肠杆菌中表达纤维素酶的研究意义 | 第16-17页 |
| ·在酿酒酵母中表达纤维素酶的研究意义 | 第17页 |
| ·本论文的研究意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-33页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·酶与试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·方法与步骤 | 第20-33页 |
| ·T.viride的培养 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌转化子的诱导培养 | 第21页 |
| ·酿酒酵母转化子的诱导培养 | 第21页 |
| ·刚果红染色法 | 第21-22页 |
| ·EGI和EGIII的酶活力检测 | 第22-25页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第25页 |
| ·绿色木霉Trichoderma viride总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·反转录 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27-29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第29-30页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量制备 | 第30页 |
| ·酿酒酵母质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第31页 |
| ·连接产物化学转化大肠杆菌感受态细胞 | 第31页 |
| ·质粒DNA化学转化酿酒酵母感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第32页 |
| ·酿酒酵母转化子的筛选和验证 | 第32-33页 |
| 第三章 RNA的提取与反转录 | 第33-35页 |
| ·绿色木霉总RNA的提取 | 第33页 |
| ·反转录与目的基因的扩增 | 第33-35页 |
| 第四章 EGI与EGIII在大肠杆菌中的克隆表达 | 第35-42页 |
| ·EGI在大肠杆菌中的克隆表达 | 第35-38页 |
| ·重组质粒的构建与命名 | 第35页 |
| ·不含信号肽EGI的cDNA基因(egl1)的克隆 | 第35-36页 |
| ·egl1的序列分析 | 第36-37页 |
| ·EGI的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第37页 |
| ·重组菌葡聚糖内切酶活力的测定 | 第37-38页 |
| ·包涵体的检测 | 第38页 |
| ·EGIII在大肠杆菌中的克隆表达 | 第38-42页 |
| ·重组质粒的构建与命名 | 第38页 |
| ·不含信号肽的egl3的克隆 | 第38-39页 |
| ·egl3的序列分析 | 第39-40页 |
| ·EGIII表达产物的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·重组菌葡聚糖内切酶的CMCase活力测定 | 第41-42页 |
| 第五章 EGI在酿酒酵母中的表达 | 第42-48页 |
| ·重组质粒PYES2-egl1的构建 | 第42-44页 |
| ·重组质粒的构建方法 | 第42页 |
| ·携带信号肽的egl1的克隆 | 第42-43页 |
| ·egl1序列分析与蛋白质分析 | 第43-44页 |
| ·EGI在酿酒酵母中的表达 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pYES2-egl1转化酿酒酵母 | 第44页 |
| ·有酶活转化子的平板筛选 | 第44-45页 |
| ·重组转化子的酶学性质检测 | 第45-48页 |
| ·诱导时间与酶活的关系 | 第45页 |
| ·酶解温度对酶活的影响 | 第45-48页 |
| 第六章 讨论 | 第48-53页 |
| ·T.viride总RNA提取以及基因克隆中的问题 | 第48页 |
| ·真核基因在大肠杆菌中的表达 | 第48-49页 |
| ·大肠杆菌表达EGI无活力的原因 | 第49页 |
| ·EGIII在大肠杆菌的表达 | 第49-51页 |
| ·EGIII在大肠杆菌表达量低的原因 | 第50-51页 |
| ·EGI在酿酒酵母中的表达 | 第51-53页 |
| ·酿酒酵母的转化与验证 | 第51-52页 |
| ·硫酸铵沉淀对酶活的影响 | 第52-53页 |
| 第七章 结论与展望 | 第53-55页 |
| ·结论 | 第53页 |
| ·问题与展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第68页 |
