| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 缩略词表 | 第20-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-55页 |
| 第一节 哺乳动物核移植技术的研究进展和应用前景 | 第22-34页 |
| ·体细胞核移植技术相关程序的研究进展 | 第22-30页 |
| ·供体细胞的准备 | 第22-24页 |
| ·受体卵母细胞的培养和去核 | 第24-26页 |
| ·构建重构胚的方法 | 第26-28页 |
| ·重构胚的激活 | 第28-29页 |
| ·重构胚的培养和移植 | 第29-30页 |
| ·奶牛体细胞核移植技术的应用前景 | 第30-32页 |
| ·在基础学科研究上的应用 | 第30页 |
| ·在生产转基因动物和产品上的应用 | 第30-31页 |
| ·在畜牧业生产上的应用 | 第31-32页 |
| ·牛体细胞核移植技术存在的问题 | 第32-34页 |
| ·成功率低 | 第32页 |
| ·后代发育异常 | 第32-33页 |
| ·核移植胚胎的营养需求尚不明确 | 第33-34页 |
| 第二节 哺乳动物体细胞核移植技术相关机理的研究进展 | 第34-45页 |
| ·重构胚细胞核的重建和核重编程 | 第34-36页 |
| ·核重建 | 第34-35页 |
| ·核仁及染色质的变化 | 第35-36页 |
| ·DNA甲基化 | 第36-38页 |
| ·基因印迹 | 第38-39页 |
| ·X染色体失活 | 第39-40页 |
| ·端粒和端粒酶 | 第40-42页 |
| ·线粒体命运 | 第42-44页 |
| ·展望 | 第44-45页 |
| 第三节 营养因素对卵母细胞体外成熟和植前胚胎体外发育的影响 | 第45-53页 |
| ·基础培养液 | 第45-46页 |
| ·激素 | 第46页 |
| ·蛋白质及大分子添加物 | 第46-47页 |
| ·葡萄糖 | 第47-49页 |
| ·氨基酸 | 第49-50页 |
| ·生长因子 | 第50-51页 |
| ·抗氧化剂 | 第51-53页 |
| 第四节 本课题主要研究内容及其意义 | 第53-55页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第53页 |
| ·主要研究内容 | 第53-55页 |
| 第二章 奶牛核移植供体细胞系的建立 | 第55-78页 |
| 第一节 奶牛耳部成纤维细胞系的建立 | 第55-63页 |
| ·引言 | 第55-56页 |
| ·材料与方法 | 第56-58页 |
| ·溶液的配制 | 第56页 |
| ·仪器及耗材 | 第56-57页 |
| ·成年奶牛耳部组织的采集 | 第57页 |
| ·组织块贴壁培养 | 第57页 |
| ·成纤维细胞的传代培养 | 第57页 |
| ·成纤维细胞生长曲线测定 | 第57-58页 |
| ·细胞核型分析 | 第58页 |
| ·细胞的冷冻保存 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-61页 |
| ·成纤维细胞的生长特征 | 第58-59页 |
| ·成纤维细胞的生长曲线 | 第59-60页 |
| ·成纤维细胞的染色体核型 | 第60页 |
| ·成纤维细胞的分离纯化 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·成纤维细胞系的建立 | 第61页 |
| ·成纤维细胞的纯化 | 第61页 |
| ·成纤维细胞的染色体核型分析 | 第61-63页 |
| 第二节 奶牛输卵管上皮细胞系的建立 | 第63-67页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·材料与方法 | 第63-64页 |
| ·溶液的配制 | 第63页 |
| ·仪器与耗材 | 第63-64页 |
| ·奶牛输卵管上皮细胞的原代培养 | 第64页 |
| ·输卵管上皮细胞的传代培养 | 第64页 |
| ·输卵管上皮细胞的生长特征和生长曲线 | 第64页 |
| ·输卵管上皮细胞的核型分析及冷冻保存 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-66页 |
| ·输卵管上皮细胞的生长特征 | 第64-65页 |
| ·输卵管上皮细胞的生长曲线 | 第65页 |
| ·输卵管上皮细胞的染色体核型 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| 第三节 利用无血清培养液培养奶牛卵丘细胞 | 第67-72页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料与方法 | 第67-69页 |
| ·溶液的配制 | 第67-68页 |
| ·仪器及耗材 | 第68页 |
| ·卵丘细胞的原代培养 | 第68页 |
| ·卵丘细胞的传代培养 | 第68页 |
| ·细胞生长曲线的绘制 | 第68-69页 |
| ·卵丘细胞的核型分析及冷冻保存 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-70页 |
| ·卵丘细胞的生长特征 | 第69页 |
| ·卵丘细胞的生长曲线 | 第69-70页 |
| ·卵丘细胞的染色体核型 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第四节 体外培养的奶牛成纤维细胞、输卵管上皮细胞及卵丘细胞的细胞周期研究 | 第72-78页 |
| ·引言 | 第72-73页 |
| ·材料与方法 | 第73-74页 |
| ·溶液的配制 | 第73页 |
| ·仪器及耗材 | 第73页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第73-74页 |
| ·试验设计 | 第74页 |
| ·数据统计 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-76页 |
| ·不同培养条件对奶牛成纤维细胞周期的影响 | 第74-75页 |
| ·不同培养条件对奶牛输卵管上皮细胞周期的影响 | 第75页 |
| ·不同培养条件对奶牛卵丘细胞周期的影响 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第三章 无血清、化学成分明确的奶牛卵母细胞体外成熟培养液的优化 | 第78-103页 |
| 第一节 非营养因素对奶牛卵母细胞体外成熟和发育潜能的影响 | 第79-89页 |
| ·引言 | 第79页 |
| ·材料与方法 | 第79-83页 |
| ·溶液的配制 | 第79-80页 |
| ·仪器及耗材 | 第80页 |
| ·卵巢的采集 | 第80页 |
| ·卵母细胞的采集及分类 | 第80-81页 |
| ·卵母细胞的体外培养及成熟判断 | 第81-82页 |
| ·体外受精及胚胎培养 | 第82-83页 |
| ·试验设计 | 第83页 |
| ·数据统计 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-86页 |
| ·季节对奶牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响 | 第83-84页 |
| ·卵泡大小对奶牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响 | 第84-85页 |
| ·采集方法对奶牛卵母细胞收获数量和质量的影响 | 第85页 |
| ·采集方法对奶牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-89页 |
| 第二节 营养因素对奶牛卵母细胞体外成熟和发育潜能的影响及机理研究 | 第89-103页 |
| ·引言 | 第89-91页 |
| ·材料与方法 | 第91-93页 |
| ·主要溶液的配制 | 第91页 |
| ·仪器及耗材 | 第91页 |
| ·卵母细胞的采集及体外成熟 | 第91页 |
| ·成熟卵母细胞的GSH检测 | 第91-92页 |
| ·体外受精及胚胎培养 | 第92页 |
| ·试验设计 | 第92-93页 |
| ·数据统计 | 第93页 |
| ·结果与分析 | 第93-98页 |
| ·培养液对奶牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响 | 第93-94页 |
| ·葡萄糖对奶牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响 | 第94-95页 |
| ·IGF-I对奶牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响 | 第95-96页 |
| ·GTPs对奶牛卵母细胞体外成熟及发育能力的影响 | 第96页 |
| ·奶牛卵母细胞在优化的SOFaa培养液中的成熟及胚胎早期发育 | 第96-98页 |
| ·成熟卵母细胞内GSH的含量 | 第98页 |
| ·讨论 | 第98-103页 |
| 第四章 奶牛卵母细胞激活条件的优化 | 第103-113页 |
| 1 引言 | 第103-104页 |
| 2 材料与方法 | 第104-108页 |
| ·主要溶液的配制 | 第104-105页 |
| ·仪器及耗材 | 第105页 |
| ·卵母细胞获取及体外成熟 | 第105页 |
| ·卵母细胞的孤雌激活 | 第105-106页 |
| ·体外受精及胚胎培养 | 第106页 |
| ·卵母细胞激活和体外受精后的评价 | 第106页 |
| ·孤雌胚核型制备 | 第106页 |
| ·胚胎凋亡检测 | 第106-107页 |
| ·实验设计 | 第107页 |
| ·数据统计 | 第107-108页 |
| 3 结果与分析 | 第108-110页 |
| ·单独激活处理对奶牛卵母细胞孤雌胚发育的影响 | 第108页 |
| ·联合激活处理对奶牛卵母细胞孤雌胚发育的影响 | 第108-109页 |
| ·联合激活处理对奶牛孤雌胚倍性的影响 | 第109-110页 |
| ·联合激活处理对奶牛孤雌胚凋亡的影响 | 第110页 |
| 4 讨论 | 第110-113页 |
| 第五章 优化的卵母细胞体外成熟培养液和激活策略在奶牛克隆技术中的应用 | 第113-123页 |
| 1 前言 | 第113-115页 |
| 2 材料与方法 | 第115-117页 |
| ·主要溶液的配制 | 第115页 |
| ·体细胞的准备 | 第115页 |
| ·供体细胞的准备 | 第115页 |
| ·共培养细胞的培养 | 第115页 |
| ·受体卵母细胞的准备 | 第115-116页 |
| ·核移植操作及融合 | 第116-117页 |
| ·重构胚的化学激活及体外培养 | 第117页 |
| ·试验设计 | 第117页 |
| ·数据统计 | 第117页 |
| 3 结果与分析 | 第117-120页 |
| ·供核细胞类型对核移植效率的影响 | 第118页 |
| ·卵母细胞培养液对核移植效率的影响 | 第118-120页 |
| ·核质互作对核移植效率的影响 | 第120页 |
| 4 讨论 | 第120-123页 |
| 第六章 绿茶多酚对奶牛IVF和NT植前胚胎体外发育能力的影响及机理研究 | 第123-132页 |
| 1 前言 | 第123-124页 |
| 2 材料与方法 | 第124-126页 |
| ·主要溶液的配制 | 第125页 |
| ·卵母细胞的获取及成熟 | 第125页 |
| ·体外受精及胚胎体外培养 | 第125页 |
| ·核移植及重构胚体外培养 | 第125页 |
| ·GSH检测 | 第125页 |
| ·试验设计 | 第125-126页 |
| ·数据统计 | 第126页 |
| 3 结果与分析 | 第126-129页 |
| ·受精液中添加GTPs对奶牛IVF胚胎体外发育的影响 | 第126-127页 |
| ·胚胎培养液中添加GTPs对奶牛IVF胚胎体外发育的影响 | 第127-128页 |
| ·胚胎培养液中添加GTPs对奶牛NT胚胎体外发育的影响 | 第128页 |
| ·GTPs对奶牛IVF胚胎细胞内GSH含量的影响 | 第128-129页 |
| ·GTPs对奶牛NT胚胎细胞内GSH含量的影响 | 第129页 |
| 4 讨论 | 第129-132页 |
| 第七章 提示与创新点 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-156页 |
| 附录 | 第156-158页 |
| 在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第158页 |
