| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-11页 |
| 英文摘要 | 第11-15页 |
| 前言 | 第15-35页 |
| 1. 阐释基因表达调控规律是后基因组时代的重要课题 | 第15页 |
| 2. 真核基因表达有序的开和关是生物体分化发育进程中的重要事件 | 第15-27页 |
| ·真核基因表达调控是多层次有步骤进行的过程 | 第16-24页 |
| ·染色质结构变化是真核基因表达调控的重要前提 | 第18-23页 |
| ·核区室结构域的变化是真核基因表达调控的最高层次 | 第23-24页 |
| ·真核基因在分化发育中的表达调控是多种因素共同参与完成的 | 第24-27页 |
| 3. 真核基因表达的建立和保持是保证生物体分化发育稳定的重要事件 | 第27-34页 |
| ·复制依赖的真核基因表达的建立 | 第28-29页 |
| ·细胞分裂中真核基因表达的保持 | 第29-34页 |
| ·顺式记忆元件和相关蛋白复合物 | 第29-33页 |
| ·表观记忆信号 | 第33-34页 |
| 4. 本课题研究的理论问题与实验设计 | 第34-35页 |
| 材料与方法 | 第35-53页 |
| 实验材料 | 第35-37页 |
| 1. 细胞系 | 第35页 |
| 2. 交联试剂 | 第35页 |
| 3. 有丝分裂同步化试剂 | 第35页 |
| 4. 蛋白酶抑制剂 | 第35页 |
| 5. 修饰酶 | 第35页 |
| 6. 抗体 | 第35-36页 |
| 7. 主要试剂 | 第36页 |
| 8. 引物合成 | 第36页 |
| 9. 主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 实验方法 | 第37-53页 |
| 1. 细胞分裂中染色质活性和转录记忆机制研究的基本技术路线流程图 | 第37页 |
| 2. 细胞培养 | 第37-38页 |
| ·MEL细胞生长条件 | 第37页 |
| ·MEL细胞传代 | 第37-38页 |
| ·MEL细胞的复苏和冻存 | 第38页 |
| 3. 细胞周期同步化 | 第38-39页 |
| ·细胞周期同步化试剂Nocodazole的配置 | 第38页 |
| ·用Nocodazole处理将哺乳动物细胞同步化到有丝分裂期 | 第38页 |
| ·流式细胞仪测定细胞DNA含量确定同步化效果 | 第38-39页 |
| ·收集细胞 | 第38页 |
| ·PI染色法测定细胞周期 | 第38-39页 |
| 4. 免疫荧光观察有丝分裂时组蛋白修饰和转录因子的存在情况 | 第39-40页 |
| ·多聚甲醛固定 | 第39页 |
| ·低渗处理 | 第39页 |
| ·封闭 | 第39页 |
| ·一抗孵育 | 第39页 |
| ·二抗孵育 | 第39-40页 |
| ·DAPI或PI染色 | 第40页 |
| ·封片 | 第40页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察记录 | 第40页 |
| 5. 用酸抽提法提取细胞总组蛋白 | 第40-41页 |
| ·细胞收集和清洗 | 第40页 |
| ·细胞裂解 | 第40-41页 |
| ·酸溶组蛋白 | 第41页 |
| ·丙酮沉淀组蛋白 | 第41页 |
| ·组蛋白的溶解和定量 | 第41页 |
| 6. Western blotting分析细胞总组蛋白修饰 | 第41-45页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第41-43页 |
| ·上样、电泳 | 第43-44页 |
| ·电转移 | 第44页 |
| ·杂交 | 第44-45页 |
| 7 不同转录状态基因启动子区的组蛋白修饰在有丝分裂时的保留分析 | 第45-50页 |
| ·不同转录状态基因的选择 | 第45-46页 |
| ·引物的设计和引物序列 | 第46-47页 |
| ·染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP) | 第47-50页 |
| ·未同步化和同步化MEL细胞的甲醛固定 | 第47页 |
| ·交联固定后细胞核的裂解与保存 | 第47-48页 |
| ·染色质DNA的超声打断及鉴定 | 第48页 |
| ·特异抗体与染色质复合物的结合 | 第48页 |
| ·抗体与染色质复合物的沉淀和洗涤 | 第48页 |
| ·沉淀产物的洗脱 | 第48-49页 |
| ·染色质复合物的解交联与DNA片段的纯化、回收 | 第49-50页 |
| ·PCR分析 | 第50页 |
| 8. 远端调控区的组蛋白修饰在有丝分裂时的保留分析 | 第50-51页 |
| ·选择分析的远端调控片段 | 第50页 |
| ·引物设计和引物序列 | 第50-51页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第51页 |
| ·PCR分析 | 第51页 |
| 9. 远端调控区结合的特异转录因子在有丝分裂时的保留分析 | 第51-53页 |
| ·选择分析的特异转录因子以及引物设计和引物序列 | 第51-52页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第52页 |
| ·PCR分析 | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-78页 |
| 1. MEL细胞的同步化和同步化鉴定 | 第53-57页 |
| ·Nocodazole使细胞同步于分裂期 | 第53页 |
| ·M期标记抗体分析细胞同步化状态 | 第53-55页 |
| ·流式细胞仪分析同步化指数 | 第55-57页 |
| 2. 活性组蛋白修饰在M期染色体上仍有保留 | 第57-61页 |
| ·组蛋白H3和H4乙酰化修饰在M期染色体上的保留 | 第57-58页 |
| ·组蛋白H3和H4乙酰化修饰在未同步化和同步化到M期的MEL细胞群体中总的变化分析 | 第58-59页 |
| ·组蛋白H3-K4和K79双甲基化修饰在M期染色体上的保留 | 第59-60页 |
| ·组蛋白H3-K4和K79双甲基化修饰在未同步化和同步化到M期的MEL细胞群体中总的变化分析 | 第60-61页 |
| 3. 有丝分裂时不同转录状态基因启动子区活性组蛋白修饰的保留分析 | 第61-65页 |
| ·不同转录状态基因启动子区组蛋白H3和H4乙酰化修饰的保留分析 | 第62-63页 |
| ·不同转录状态基因启动子区组蛋白H3-K4和K79双甲基化修饰的保留分析 | 第63-65页 |
| 4. 有丝分裂时珠蛋白基因簇远端调控区表观记忆信号的分析 | 第65-75页 |
| ·有丝分裂时珠蛋白基因簇远端调控区的活性组蛋白修饰的保留分析 | 第66-71页 |
| ·有丝分裂时珠蛋白基因簇远端调控区结合的特异转录因子的保留分析 | 第71-75页 |
| 5. 有丝分裂时组蛋白H3异构体H3.3在染色体上的变化 | 第75-78页 |
| 讨论 | 第78-89页 |
| 1. 有丝分裂时活性组蛋白修饰保留是一种普遍有效的基因表达的表观记忆方式 | 第78-82页 |
| ·活性组蛋白修饰在M期染色体上仍有保留 | 第79-81页 |
| ·有丝分裂染色质失活时多种组蛋白修饰的保留记忆了基因的转录状态 | 第81-82页 |
| 2. 有丝分裂时远端调控元件通过多种组蛋白修饰和结合的特异转录因子的保留辅助了基因转录状态的记忆 | 第82-83页 |
| 3. 组蛋白H3异构体H3.3在转录记忆中可能的作用 | 第83-84页 |
| 4. 特异转录因子在转录记忆中可能的作用 | 第84-86页 |
| 5. 有丝分裂后转录的表观记忆信号在转录重新激活中的可能作用 | 第86-87页 |
| ·活性组蛋白修饰为激活转录的蛋白因子提供结合表面 | 第86-87页 |
| ·保留的特异转录因子可能募集其它激活转录的蛋白因子 | 第87页 |
| 6. 本研究的不足之处及今后的工作设想 | 第87-89页 |
| 小结 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 文献综述 | 第99-118页 |
| 英文名词及缩写 | 第118-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 个人简历 | 第122页 |
