| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| ·课题的提出 | 第11-12页 |
| ·植物抗寒研究进展 | 第12-17页 |
| ·植物抗寒生理生化研究 | 第12页 |
| ·植物抗寒分子机理研究 | 第12-13页 |
| ·胁迫诱导基因表达 | 第12-13页 |
| ·植物冷诱导基因 | 第13页 |
| ·冷诱导基因转录调控因子—CBF | 第13-17页 |
| ·CBF的鉴定 | 第13-14页 |
| ·CBF的结构特征 | 第14-15页 |
| ·CBF的表达特性 | 第15-16页 |
| ·CBF的生理生化功能 | 第16-17页 |
| ·CBF在植物冷驯化中的作用 | 第17页 |
| ·RACE技术简介 | 第17-23页 |
| ·RACE的基本原理 | 第18-19页 |
| ·RACE的优缺点与改良 | 第19-21页 |
| ·SMART-RACE | 第21-23页 |
| ·研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·试验材料 | 第24-25页 |
| ·总RNA提取 | 第25-27页 |
| ·外源RNase灭活处理 | 第25-26页 |
| ·柑橘叶片总RNA提取 | 第26页 |
| ·RNA质量检测与浓度测定 | 第26-27页 |
| ·柑橘CBF AP2保守区段的克隆 | 第27-33页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第27页 |
| ·简并引物筛选 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR | 第28-29页 |
| ·产物回收、克隆及测序 | 第29-33页 |
| ·目的片段回收 | 第29-30页 |
| ·目的片段与pMD18-T载体连接 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第30-31页 |
| ·转化及蓝白斑筛选 | 第31页 |
| ·质粒提取 | 第31-32页 |
| ·双酶切及PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·测序 | 第33页 |
| ·序列分析鉴定 | 第33页 |
| ·枳壳CBF全长cDNA的克隆 | 第33-37页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第33-34页 |
| ·5’-RACE | 第34-35页 |
| ·3’-RACE | 第35-36页 |
| ·产物回收、克隆、测序、分析 | 第36页 |
| ·cDNA完整序列拼接 | 第36-37页 |
| ·完整ORF的克隆 | 第37页 |
| ·RT-PCR法 | 第37页 |
| ·酶切拼接法 | 第37页 |
| ·生物信息学分析 | 第37-38页 |
| ·技术路线 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-72页 |
| ·RNA的定性定量分析 | 第39-40页 |
| ·柑橘CBF AP2片段的克隆与分析 | 第40-45页 |
| ·柑橘CBF AP2片段的克隆 | 第40-42页 |
| ·柑橘CBF AP2片段的序列分析 | 第42-45页 |
| ·同源性分析与鉴定 | 第42-43页 |
| ·序列间比较分析 | 第43-45页 |
| ·PtCBFa与PtCBF1全长cDNA的克隆与分析 | 第45-70页 |
| ·全长cDNA的克隆 | 第45-46页 |
| ·ORF分析 | 第46-49页 |
| ·同源性分析 | 第49-52页 |
| ·结构与功能的生物信息学分析 | 第52-70页 |
| ·全长cDNA序列的限制性内切酶位点分析 | 第52-53页 |
| ·密码子偏爱性分析 | 第53-57页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第57-62页 |
| ·编码产物的分类信号和定位预测 | 第62-64页 |
| ·特征序列分析 | 第64-67页 |
| ·二级结构分析 | 第67页 |
| ·三维结构预测 | 第67-70页 |
| ·PtCBFa与PtCBF1间比较分析 | 第70-72页 |
| ·二者间共同点 | 第70-71页 |
| ·二者间差异 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-78页 |
| ·简并引物RT-PCR技术要点 | 第72-73页 |
| ·RACE技术要点 | 第73-74页 |
| ·CBF与柑橘冷驯化 | 第74-76页 |
| ·研究展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |