| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 第一章 水通道蛋白在肿瘤细胞运动中的功能研究 | 第9-38页 |
| 第一部分 引言 | 第9-18页 |
| 一、水通道蛋白的发现、命名及分类 | 第9页 |
| 二、水通道蛋白的分子结构 | 第9-11页 |
| （一） 水通道蛋白的初级结构 | 第9-10页 |
| （二） 水通道蛋白的高级结构 | 第10-11页 |
| 三、水通道蛋白的组织细胞分布及表达调控 | 第11-13页 |
| 四、水通道蛋白的生理功能研究 | 第13-16页 |
| （一） 水通道在呼吸系统的功能研究 | 第13页 |
| （二） 水通道在消化系统的功能研究 | 第13-14页 |
| （三） 水通道在泌尿系统的功能研究 | 第14-15页 |
| （四） 水通道在神经系统中的功能研究 | 第15页 |
| （五） 水通道在眼球生理中的功能研究 | 第15-16页 |
| （六） 水通道在皮肤及肌肉生理中的功能研究 | 第16页 |
| （七） 水通道参与细胞迁移活动的功能研究 | 第16页 |
| 五、水通道蛋白在未来基础研究和临床应用前景 | 第16-17页 |
| 六、本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第18-27页 |
| 一、实验材料 | 第18-19页 |
| （一） 主要生化和分子生物学试剂 | 第18页 |
| （二） 质粒及载体等 | 第18页 |
| （三） 细胞系 | 第18页 |
| （四） 细菌菌株 | 第18页 |
| （五） 主要实验仪器及耗材 | 第18-19页 |
| 二、实验方法 | 第19-27页 |
| （一） 细胞培养 | 第19页 |
| （二） 稳定转染和水通透性测定 | 第19-20页 |
| （三） 细胞的 RT-PCR 检测 | 第20-21页 |
| （四） 免疫荧光 | 第21-22页 |
| （五） 免疫印迹 | 第22-23页 |
| （六） 腺病毒介导AQP1 在SMMC-72211P_f / hP_f细胞的表达 | 第23-26页 |
| （七） 细胞贴附及增殖能力检测 | 第26页 |
| （八） 细胞穿孔迁移实验 | 第26页 |
| （九） 平板单层细胞损伤愈合实验 | 第26页 |
| （十） 统计分析 | 第26-27页 |
| 第三部分 实验结果 | 第27-36页 |
| 一、EYFP-H148Q-V1635 质粒稳定转染各肿瘤细胞结果 | 第27-30页 |
| （一） 稳定表达 V1635 绿色荧光蛋白的肿瘤细胞 | 第27页 |
| （二） 细胞水通道功能功能荧光检测分析 | 第27-28页 |
| （三） 细胞的RT-PCR 检测结果 | 第28-29页 |
| （四） Immunofluorescence 及 Western blot 鉴定结果 | 第29-30页 |
| 二、腺病毒介导 AQP1 在 SMMC-7221 细胞的表达 | 第30-33页 |
| （一） 人 AQP1 腺病毒转移载体（pENTER-AQP1）的构建 | 第30-31页 |
| （二） 人AQP1 重组腺病毒表达载体的构建 | 第31-32页 |
| （三 A）QP1 重组腺病毒滴度的测定 | 第32页 |
| （四） 腺病毒介导 AQP1 的表达 | 第32-33页 |
| 三、细胞贴附及增殖能力检测结果 | 第33-34页 |
| 四、细胞钻孔迁移实验结果 | 第34页 |
| 五、细胞损伤愈合实验结果 | 第34-36页 |
| 第四部分 讨论 | 第36-37页 |
| 第五部分 结论 | 第37-38页 |
| 第二章 EYFP-V1635 转基因小鼠模型的建立 | 第38-62页 |
| 第一部分 引言 | 第38-46页 |
| 一、绿色荧光蛋白及其突变体的分子特性 | 第38-41页 |
| （一） GFP 的分子结构特性及发光机制 | 第38-39页 |
| （二） GFP 的光谱特性 | 第39页 |
| （三） GFP 的改进 | 第39-40页 |
| （四 E）YFP-V1635 的分子特性 | 第40-41页 |
| 二、动物转基因与基因打靶 | 第41-44页 |
| （一） 动物转基因研究概况 | 第41页 |
| （二） 转基因动物制备方法简介 | 第41-43页 |
| （三） 基因打靶（Gene targeting）技术的应用 | 第43-44页 |
| 三 R、OSA26 基因位点的特性及其在动物转基因中的应用 | 第44页 |
| 四、本研究的目的及意义 | 第44-46页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第46-55页 |
| 一、实验材料 | 第46-47页 |
| （一） 主要化学及生化试剂 | 第46页 |
| （二） 培养基 | 第46页 |
| （三） 血清 | 第46页 |
| （四） 酶类 | 第46页 |
| （五） 细胞系 | 第46页 |
| （六） 细菌菌株 | 第46页 |
| （七） 实验仪器及耗才 | 第46-47页 |
| 二、实验方法 | 第47-55页 |
| （一） 培养基及溶液的配制 | 第47页 |
| （二） 打靶载体的构建及制备 | 第47-49页 |
| （三） STO 滋养层细胞的培养 | 第49-50页 |
| （四） E14 胚胎干细胞的培养及转染 | 第50-51页 |
| （五） 胚胎的显微操作 | 第51-54页 |
| （六） 转基因小鼠的鉴定与传代 | 第54-55页 |
| 第三部分 实验结果 | 第55-60页 |
| 一、ROSA26Targeting-EYFP-V1635 打靶载体的构建 | 第55-56页 |
| （一）ROSA26Targeting-EYFP-V1635 打靶载体的构建策略 | 第55页 |
| （二）ROSA26Targeting-EYFP-V1635 打靶载体的构建结果 | 第55-56页 |
| 二、ES 细胞筛选鉴定果 | 第56-57页 |
| 三、转基因小鼠的鉴定 | 第57-60页 |
| 第四部分 讨论 | 第60-61页 |
| 第五部分 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 主要英文缩写词表 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作 者 简 历 | 第74-75页 |
| 攻读博士学位期间已发表的论文 | 第75页 |
