| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 引言 | 第8-21页 |
| 一、植物转基因研究策略 | 第8-12页 |
| (一) 植物转化 | 第8-10页 |
| 1. 农杆菌介导法 | 第8-9页 |
| 2. 基因枪法 | 第9-10页 |
| 3. 花粉通道法 | 第10页 |
| (二) 转基因植株的鉴定方法 | 第10-12页 |
| 1. 外源基因整合的鉴定 | 第10-11页 |
| 2. 外源基因转录水平的鉴定 | 第11页 |
| 3. 外源基因表达蛋白的检测 | 第11页 |
| 4. 报告基因的酶法检测 | 第11-12页 |
| 二、马铃薯转基因研究的进展 | 第12-15页 |
| (一) 马铃薯抗真菌基因工程研究 | 第12-13页 |
| (二) 马铃薯抗病毒基因工程研究 | 第13-14页 |
| (三) 马铃薯抗虫基因工程研究 | 第14-15页 |
| 1. Bt基因及其应用 | 第14页 |
| 2. 蛋白酶抑制剂基因及其应用 | 第14-15页 |
| 3. 植物凝集素基因及其应用 | 第15页 |
| 三、雪花莲凝集素的生物学功能及在植物基因工程中的应用 | 第15-17页 |
| (一) 植物外源凝集素的分类及结构 | 第15-16页 |
| (二) GNA 的杀虫机理 | 第16页 |
| (三) 转 GNA 基因植物的抗虫性 | 第16-17页 |
| 四、转基因作物的安全性问题及对策 | 第17-19页 |
| (一) 转基因作物所面临的安全性问题 | 第17-19页 |
| 1. 食品安全性 | 第17-18页 |
| 2. 环境安全性 | 第18-19页 |
| (二) 转基因作物的对策 | 第19页 |
| 1. 制定安全性政策和管理法规 | 第19页 |
| 2. 发展更加安全的转基因技术体系 | 第19页 |
| 五、本实验的研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 材料与方法 | 第21-31页 |
| 一、实验材料 | 第21-22页 |
| (一) 植物材料 | 第21页 |
| (二) 质粒和菌种 | 第21页 |
| (三) 化学试剂、酶类及抗体 | 第21页 |
| (四)PCR 引物 | 第21页 |
| (五) 植物激素、抗生素及除草剂 | 第21页 |
| (六) 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 二、实验方法 | 第22-31页 |
| (一) 马铃薯组织培养 | 第22页 |
| 1. 马铃薯脱毒苗的培养 | 第22页 |
| 2. 愈伤组织诱导及分化培养培养基的选择 | 第22页 |
| (二) 农杆菌介导的马铃薯的遗传转化 | 第22-23页 |
| 1. 马铃薯脱毒苗的培养 | 第22页 |
| 2. 农杆菌的准备 | 第22-23页 |
| 3. 侵染 | 第23页 |
| 4. 转化后马铃薯的再生 | 第23页 |
| (三) 转化马铃薯的 GUS 组织化学分析 | 第23-24页 |
| 1. GUS 染色液的配制 | 第23-24页 |
| 2. GUS 染色方法 | 第24页 |
| (四) 转化马铃薯的 PCR 检测 | 第24-25页 |
| 1. 植物基因组的提取试剂 | 第24页 |
| 2. 采用改良的 CTAB 法提取植物总 DNA | 第24-25页 |
| 3. PCR 检测 | 第25页 |
| (五) 转化马铃薯的 PCR-Southern 检测 | 第25-27页 |
| 1. 植物基因组 DNA 的制备 | 第25页 |
| 2. 植物基因组 DNA 的 PCR 反应 | 第25页 |
| 3. PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| 4. DNA 从琼脂糖凝胶转移到固相支持物 | 第25-26页 |
| 5. 探针标记 | 第26页 |
| 6. 杂交 | 第26页 |
| 7. 洗膜与检测 | 第26-27页 |
| (六) 转化马铃薯的 ELISA 检测及 GNA 表达分析 | 第27-28页 |
| 1. 马铃薯总蛋白的提取 | 第27页 |
| 2. 马铃薯总蛋白浓度测定 | 第27-28页 |
| 3. 标准曲线绘制 | 第28页 |
| 4. ELISA 检测 | 第28页 |
| (七) 转化马铃薯的除草剂抗性检测 | 第28-29页 |
| (八) 转化马铃薯的抗桃蚜鉴定 | 第29-31页 |
| 1. 桃蚜人工饲养 | 第29-30页 |
| 2. 转基因马铃薯的抗桃蚜初步鉴定 | 第30-31页 |
| 结果与分析 | 第31-41页 |
| 一、马铃薯再生体系的建立 | 第31-33页 |
| (一) 培养基及外植体类型对马铃薯诱导率及分化率的影响 | 第31-32页 |
| (二) 不同基因型马铃薯的再生率比较 | 第32页 |
| (三) 外植体供体马铃薯的生长状态对马铃薯再生的影响 | 第32-33页 |
| 二、农杆菌介导马铃薯转化体系的建立 | 第33-36页 |
| (一) 农杆菌侵染条件的优化 | 第33-34页 |
| 1. 农杆菌菌液的浓度对转化率的影响 | 第33页 |
| 2. 侵染时间对转化率的影响 | 第33-34页 |
| 3. 真空率对转化率的影响 | 第34页 |
| (二) 共培养时间的优化 | 第34-35页 |
| (三) 选择剂选择浓度的优化 | 第35-36页 |
| (四) 抑菌素浓度的优化 | 第36页 |
| 三、农杆菌介导GNA 转化马铃薯 | 第36-37页 |
| 四、转化后再生植株的分子生物学检测 | 第37-39页 |
| (一) GNA 基因的 PCR 检测 | 第37页 |
| (二) PCR-Southern 杂交 | 第37-38页 |
| (三) ELISA 检测及 GNA 表达分析 | 第38-39页 |
| 1. 马铃薯总可溶蛋白浓度测定 | 第38页 |
| 2. ELISA检测及GNA表达分析 | 第38-39页 |
| 五、转基因马铃薯的除草剂抗性检测 | 第39-40页 |
| 六、转基因马铃薯抗桃蚜虫的初步鉴定 | 第40-41页 |
| 讨论 | 第41-43页 |
| 一、农杆菌介导马铃薯体系的建立 | 第41-42页 |
| 二、GNA 对蚜虫的抗性检测 | 第42页 |
| 三、转 GNA 基因马铃薯的安全性评估 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 一、马铃薯的再生体系的建立 | 第43页 |
| 二、农杆菌介导的马铃薯转化体系的建立 | 第43页 |
| 三、农杆菌介导 GNA 基因转化马铃薯 | 第43页 |
| 四、转化再生植株的检测 | 第43页 |
| 五、转基因 GNA 马铃薯的抗蚜虫鉴定 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 致谢 | 第48页 |
