| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 生物素的简要介绍 | 第13-14页 |
| 2 生物素的应用概况 | 第14-17页 |
| ·生物素在动物生产中的应用 | 第14-16页 |
| ·生物素在猪上的应用 | 第14-15页 |
| ·生物素在家禽中的应用 | 第15页 |
| ·生物素在反刍动物中的应用 | 第15-16页 |
| ·生物素在核酸探针标记中的应用 | 第16页 |
| ·生物素在发酵工业中的应用 | 第16-17页 |
| 3 生物素的来源 | 第17页 |
| 4 生物素生物合成的研究进展 | 第17-21页 |
| ·生物素生物合成操纵子（bio operon）基因的结构及功能 | 第17-21页 |
| ·生物素生物合成操纵子基因的表达效果及产量 | 第21页 |
| 5 枯草芽孢杆菌表达系统的概述 | 第21-22页 |
| 6 枯草杆菌整合载体的研究现状 | 第22-25页 |
| ·同源基因重组的两种方式 | 第22-23页 |
| ·提高整合拷贝数的策略 | 第23-24页 |
| ·同源重组机制的研究现状 | 第24-25页 |
| 7 生物素检测方法概述 | 第25-28页 |
| ·微生物测定法 | 第25页 |
| ·生物测定法 | 第25-26页 |
| ·酶法 | 第26页 |
| ·生化分析法 | 第26-28页 |
| 第二章 试验研究 | 第28-63页 |
| 1 材料与方法 | 第28-42页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第28-29页 |
| ·生化试剂与分子生物学试剂 | 第29页 |
| ·实验所需各种酶 | 第29页 |
| ·表达元件、枯草杆菌bio 基因序列 | 第29页 |
| ·主要试剂盒 | 第29页 |
| ·培养基及溶液 | 第29-30页 |
| ·主要的仪器设备 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-42页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·枯草杆菌基因组 DNA 的提取 | 第31页 |
| ·DNA 片段的胶回收 | 第31-32页 |
| ·酶切体系与连接体系 | 第32-33页 |
| ·PCR 实验所用引物及扩增条件 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第34-35页 |
| ·枯草杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第35-36页 |
| ·枯草芽孢杆菌化学感受态的制备及转化 | 第36-37页 |
| ·Southern biotting 方法 | 第37-38页 |
| ·生物素的微生物测定 | 第38-41页 |
| ·生物素的液相分析 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-61页 |
| ·单交叉整合实验 | 第42-48页 |
| ·单交叉整合载体 YG50 的构建 | 第42-45页 |
| ·单交叉整合 | 第45页 |
| ·单交叉整合的鉴定 | 第45-48页 |
| ·双交叉整合实验 | 第48-58页 |
| ·双交叉整合载体的构建 | 第48-54页 |
| ·双交叉整合 | 第54-55页 |
| ·双交叉整合的鉴定 | 第55-58页 |
| ·生物素的检测 | 第58-61页 |
| 3 讨论 | 第61-62页 |
| ·Cm 抗性基因的克隆 | 第61页 |
| ·整合 | 第61-62页 |
| ·化学整合与电转整合 | 第62页 |
| ·拷贝数的扩增 | 第62页 |
| 4 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |