| 第一章 引言 | 第1-17页 |
| 1 柿果贮藏技术研究进展 | 第12页 |
| 2 乙烯与果实的成熟衰老 | 第12-13页 |
| 3 乙烯生物合成 | 第13-14页 |
| ·乙烯生物合成途径 | 第13页 |
| ·ACC合成酶基因 | 第13-14页 |
| ·ACC氧化酶基因 | 第14页 |
| 4 乙烯信号转导研究进展 | 第14页 |
| 5 调控果实成熟的基因工程研究 | 第14-16页 |
| ·反义RNA技术 | 第15页 |
| ·RNA干扰技术 | 第15-16页 |
| 6 本研究的目的、意义 | 第16-17页 |
| 第二章 柿果ACC合成酶基因cDNA片段的克隆 | 第17-26页 |
| 1 材料与试剂 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·菌株和载体 | 第17页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·主要试剂溶液的配制 | 第17-18页 |
| 2 试验方法 | 第18-22页 |
| ·柿果中总RNA的提取及其浓度的检测 | 第18-19页 |
| ·柿果中总RNA的提取 | 第18-19页 |
| ·检测RNA的质量与纯度 | 第19页 |
| ·mRNA的反转录 | 第19页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第19-20页 |
| ·引物设计与合成 | 第19页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第19-20页 |
| ·目的扩增片段的回收 | 第20页 |
| ·目的片段与T载体连接 | 第20-21页 |
| ·连接产物的转化 | 第21页 |
| ·感受态细胞的制备(钙化法) | 第21页 |
| ·连接产物的转化 | 第21页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第21-22页 |
| ·蓝白斑(α-互补)筛选 | 第21页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第21-22页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第22页 |
| ·阳性克隆的序列测定及其同源性分析 | 第22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-26页 |
| ·柿果中RNA的提取质量 | 第22-23页 |
| ·电泳检测RT-PCR产物 | 第23页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆的序列测定及同源性分析 | 第24-26页 |
| 第三章 柿果ACC合成酶基因3'RACE的扩增 | 第26-33页 |
| 1 材料与试剂 | 第26页 |
| ·菌株与载体 | 第26页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-29页 |
| ·植物RNA的提取及检测 | 第26页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增 | 第27页 |
| ·第一轮PCR | 第27页 |
| ·第二轮PCR | 第27页 |
| ·目的扩增片段的回收 | 第27-28页 |
| ·目的片段的连接 | 第28页 |
| ·连接产物转化 | 第28页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第28-29页 |
| ·菌液PCR检测阳性克隆 | 第28页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第28页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆的序列测定及同源性分析 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-33页 |
| ·3'RACE产物的凝胶电泳 | 第29页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的序列测定及同源性分析 | 第30-33页 |
| 第四章 柿果ACC合成酶基因植物表达载体的构建及农杆菌的转化 | 第33-49页 |
| 1 材料与试剂 | 第33页 |
| ·菌株和表达载体 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器与设备 | 第33页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-40页 |
| ·ACC合成酶基因反义植物表达载体(pSMAK-ACS)的构建 | 第33-36页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·反义片段的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·反义片段PCR产物的胶回收 | 第35页 |
| ·反义表达载体的酶切连接 | 第35-36页 |
| ·连接产物转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第36页 |
| ·ACC合成酶基因RNAi表达载体的构建 | 第36-40页 |
| ·中间表达载体(pBI-ACS)的构建 | 第38-39页 |
| ·RNAi表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·构建好的植物表达载体向农杆菌中转化 | 第40页 |
| ·表达载体质粒的大量提取 | 第40页 |
| ·农杆菌(EHA101)感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·表达载体向农杆菌的转化 | 第40页 |
| ·阳性菌落的鉴定 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-49页 |
| ·正义片段与反义片段的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·反义植物表达载体的构建及检测 | 第41-43页 |
| ·反义PCR产物的酶切 | 第41页 |
| ·pSMAK311植物表达载体的双酶切 | 第41-42页 |
| ·反义植物表达载体的鉴定 | 第42-43页 |
| ·中间表达载体的鉴定 | 第43-45页 |
| ·正义PCR产物的酶切 | 第43-44页 |
| ·pBI221质粒的酶切 | 第44页 |
| ·pBI-ACS重组质粒的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·RNAi表达载体的鉴定 | 第45-47页 |
| ·酶切反义表达载体和中间载体 | 第45页 |
| ·RNAi表达载体的鉴定 | 第45-47页 |
| ·农杆菌中表达载体的菌液PCR鉴定 | 第47-49页 |
| 第五章 讨论 | 第49-52页 |
| 1 关于柿果ACC合成酶的研究 | 第49页 |
| 2 关于ACC合成酶的基因克隆 | 第49-50页 |
| ·柿果组织中总RNA的提取 | 第49页 |
| ·引物设计 | 第49-50页 |
| ·温度设置 | 第50页 |
| 3 关于表达载体的构建 | 第50-52页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第50页 |
| ·载体的选择 | 第50页 |
| ·表达载体酶切 | 第50-51页 |
| ·连接片段的浓度比 | 第51-52页 |
| 第六章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 果树学报 | 第62-66页 |