| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 一 转基因作物发展现状 | 第11-12页 |
| 二 我国的转基因作物商业化情况 | 第12页 |
| 三 除草剂基因(bar)的应用 | 第12-16页 |
| 四 FAD2基因与高油酸 | 第16-17页 |
| 五 转基因技术在油菜育种中的应用 | 第17-23页 |
| 1 农杆菌介导法 | 第17-20页 |
| ·农杆菌转化程序 | 第18-19页 |
| ·农杆菌介导法在油菜中的应用 | 第19页 |
| ·农杆菌介导法的评估 | 第19-20页 |
| ·农杆菌介导法的优点 | 第19-20页 |
| ·农杆菌介导法存在的问题 | 第20页 |
| 2 基因枪转化法 | 第20-21页 |
| ·基因枪种类及其方法 | 第20页 |
| ·基因枪转化法的在油菜中的应用 | 第20-21页 |
| ·基因枪转化法的技术评估 | 第21页 |
| 3 花粉管通道转化法 | 第21-23页 |
| 第二章 载体pBI121.XG的构建及克隆 | 第23-32页 |
| 1 材料与方法 | 第23-29页 |
| ·质粒与菌株 | 第23页 |
| ·酶、试剂及仪器 | 第23页 |
| ·DH5α、LBA4404、质粒pBI121.NF和pBARGUS的验证 | 第23-24页 |
| ·DH5α验证 | 第23页 |
| ·LBA4404的验证 | 第23-24页 |
| ·质粒pBI121.NF和pBARGUS的验证 | 第24页 |
| ·植物表达载体pBI121.XG的构建 | 第24-25页 |
| ·pBI121.XG转化大肠杆菌DH5α | 第25-28页 |
| ·大肠杆菌DB5α感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·连接产物的电激转化 | 第26页 |
| ·pBI121.XG的检测 | 第26-28页 |
| ·重组DNA质粒的快速抽提检测 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·具体步骤 | 第27页 |
| ·碱裂解法制备质粒pBI121.XG | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·具体步骤 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的酶切检测 | 第28页 |
| ·pBI121.XG转化根癌农杆菌LBA4404 | 第28-29页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·冻融法直接转化LBA4404 | 第28-29页 |
| ·菌种的保存 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-32页 |
| ·DH5α、LBA4404、质粒pBI121.NF和pBARGUS的验证结果 | 第29-30页 |
| ·pBI121.XG对大肠杆菌DH5α转化及检测 | 第30-31页 |
| ·重组DNA质粒的快速抽提检测 | 第30页 |
| ·pBI121.XG的酶切检测 | 第30-31页 |
| ·pBI121.XG对根癌农杆菌LBA4404的转化及检测 | 第31-32页 |
| 第三章 甘蓝型油菜和白菜型油菜的遗传转化及转基因油菜的获得 | 第32-39页 |
| 1 材料与方法 | 第32-36页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·菌种与质粒 | 第32页 |
| ·试剂、仪器 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·建立油菜子叶节丛生苗再生体系 | 第33页 |
| ·无菌苗的获得 | 第33页 |
| ·外植体的获得 | 第33页 |
| ·丛生苗的诱导 | 第33页 |
| ·油菜子叶节丛生苗再生体系与子叶柄再生体系的丛生苗再生率的比较 | 第33-34页 |
| ·油菜子叶柄丛生苗再生体系 | 第33-34页 |
| ·无菌苗的获得 | 第33页 |
| ·外植体的获得 | 第33页 |
| ·再生苗的诱导 | 第33-34页 |
| ·油菜子叶节丛生苗再生体系与子叶柄再生体系丛生苗再生率的比较 | 第34页 |
| ·利用根癌农杆菌介导法对油菜子叶节进行遗传转化 | 第34-36页 |
| ·实验路线 | 第34页 |
| ·实验步骤 | 第34-36页 |
| ·LBA44041工程菌侵染液的制备 | 第35页 |
| ·油菜子叶节的获得 | 第35页 |
| ·预培养 | 第35页 |
| ·共培养 | 第35页 |
| ·筛选培养 | 第35-36页 |
| ·生根培养 | 第36页 |
| ·炼苗及移栽 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-39页 |
| ·油菜子叶节丛生苗再生体系的建立 | 第36-37页 |
| ·油菜子叶节丛生苗再生体系与子叶柄再生体系丛生苗再生率的比较 | 第36-37页 |
| ·湘油15好与苍白古9—4外植体在离体培养中的比较 | 第37-39页 |
| 第四章 转化苗的分子生物学检测 | 第39-50页 |
| 1 材料与方法 | 第39-43页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·药品及仪器 | 第39-40页 |
| ·SDS法提取液 | 第39页 |
| ·CTAB法提取液 | 第39页 |
| ·山梨醇法提取液 | 第39页 |
| ·电泳缓冲液 | 第39-40页 |
| ·药品 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·油菜基因组DNA的提取 | 第40-43页 |
| ·油菜黄化苗的获得 | 第40页 |
| ·油菜基因组DNA的提取 | 第40-43页 |
| ·SDS法 | 第41页 |
| ·CTAB法 | 第41-42页 |
| ·山梨醇法 | 第42-43页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-50页 |
| ·油菜基因组DNA提取方法的比较 | 第43-44页 |
| ·从油菜基因组DNA中扩增bar基因PCR体系的建立 | 第44-47页 |
| ·fad2基因检测体系 | 第44页 |
| ·bar基因特异引物的选择 | 第44-45页 |
| ·DNA聚合酶的选择 | 第45页 |
| ·bar基因检测体系 | 第45-47页 |
| ·转化植株的PCR检测结果 | 第47-50页 |
| 第五章 讨论与小结 | 第50-53页 |
| 1 子叶节再生系统再生率远远高于子叶柄再生系统再生率的原因探讨 | 第50页 |
| 2 白菜型油菜在离体培养中的表现优于甘蓝型油菜原因的探讨 | 第50-51页 |
| 3 油菜基因组bar基因PCR检测的探讨 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |
