| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-14页 |
| 缩略词与英汉对照 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 一: 植物功能基因研究方法 | 第16-31页 |
| ·序列克隆法 | 第16页 |
| ·功能克隆法 | 第16-17页 |
| ·转座子或T-DNA标签法 | 第17页 |
| ·消减杂交法 | 第17页 |
| ·差异表达分析法 | 第17-20页 |
| ·基因功能敲除法 | 第20-22页 |
| ·反义技术 | 第21页 |
| ·基因剔除和转基因技术 | 第21-22页 |
| ·RNA干涉技术 | 第22-29页 |
| ·RNAi的研究进展 | 第22-23页 |
| ·RNAi的特征 | 第23-24页 |
| ·RNAi分子机制的研究进展 | 第24-25页 |
| ·与RNAi相关基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·RNA干涉的作用特点 | 第26-27页 |
| ·RNA介导同源DNA甲基化(RdDM) | 第27-28页 |
| ·各种小RNA的特征 | 第28-29页 |
| ·荧光定量PCR | 第29-31页 |
| ·SyberGreenI标记法 | 第30页 |
| ·TaqMAN技术 | 第30-31页 |
| ·Molecular beacon分子信标 | 第31页 |
| ·基因芯片技术 | 第31页 |
| 二: 植物开花基因研究进展 | 第31-36页 |
| 第二章 利用抑制缩减杂交研究和分离水稻开花相关基因 | 第36-60页 |
| ·引言 | 第36-37页 |
| ·材料 | 第37-42页 |
| ·供试的水稻材料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·载体和菌株 | 第37页 |
| ·主要设备 | 第37页 |
| ·主要试剂配方 | 第37-40页 |
| ·改良的SSH实验流程 | 第40-41页 |
| ·实验中所涉及的引物 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·生长点的鉴定和取材 | 第42页 |
| ·cDNA的获得 | 第42页 |
| ·cDNA的酶切和接头的连接 | 第42-43页 |
| ·抑制缩减杂交 | 第43页 |
| ·两轮抑制PCR扩增 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·差异片段的TA连接 | 第43-44页 |
| ·重组子的鉴定和保存 | 第44页 |
| ·高密度膜的制备 | 第44页 |
| ·缩减cDNA文库的筛选 | 第44-45页 |
| ·反向Northern杂交 | 第45页 |
| ·DNA序列测定和分析 | 第45页 |
| ·Northern杂交 | 第45-46页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第46页 |
| ·分析软件或工具 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-57页 |
| ·抑制缩减杂交研究的总策略 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR以及两轮抑制PCR | 第48页 |
| ·用TA连接克隆抑制PCR产物 | 第48-49页 |
| ·缩减cDNA文库构建和筛选 | 第49-50页 |
| ·反向Nothern杂交 | 第50-51页 |
| ·序列的测定 | 第51-53页 |
| ·部分基因的Northern杂交和定量PCR | 第53-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·SSH方法探讨 | 第57-58页 |
| ·水稻开花成穗基因的筛选特点 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 第三章 几个水稻开花基因的功能研究 | 第60-88页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·石狩白茅,中花11 | 第61页 |
| ·各种培养基的配方 | 第61页 |
| ·植物激素母液 | 第61页 |
| ·植物DNA抽提所需溶液 | 第61-62页 |
| ·植物微量DNA抽提液 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-66页 |
| ·目标基因的选取 | 第62页 |
| ·基因片段的获得 | 第62页 |
| ·超表达片段的获得 | 第62页 |
| ·PCR扩增反应 | 第62页 |
| ·细菌的培养 | 第62-63页 |
| ·碱裂解法抽提质粒DNA | 第63页 |
| ·质粒酶切及纯化 | 第63页 |
| ·干涉及超表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·DNA片段的回收 | 第64页 |
| ·DNA的连接 | 第64页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第64页 |
| ·装载质粒的酶切检测 | 第64-65页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备及转化 | 第65页 |
| ·农杆菌转化子的检测鉴定 | 第65页 |
| ·农杆菌的活化及悬浮 | 第65页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导及继代 | 第65-66页 |
| ·愈伤组织的浸染及共培养 | 第66页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选、预分化及分化 | 第66页 |
| ·幼苗的生根壮苗及移栽 | 第66页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第66-70页 |
| ·采用CTAB法抽提转化植株总基因组DNA | 第66-67页 |
| ·转化植株HPT的PCR检测 | 第67页 |
| ·HPT以及转化基因的Southern杂交检测 | 第67页 |
| ·RNA水平上的分子检测 | 第67页 |
| ·目标基因及HPT的Northern杂交 | 第67页 |
| ·实验中所涉及的引物 | 第67-68页 |
| ·TAIL-PCR所需引物、程序以及反应体系 | 第68-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-75页 |
| ·干涉片段从基因组中扩增 | 第70-72页 |
| ·OsEMF2-1的全长cDNA从反转录产物中扩增 | 第72-73页 |
| ·干涉质粒在农杆菌的稳定性检测 | 第73页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第73-75页 |
| ·转化植株T0代的表型 | 第75-77页 |
| ·转化植株T0代植株统计 | 第75-76页 |
| ·OsEMF2-1RNA干涉和超表达后转化植株T0代表型 | 第76-77页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第77-84页 |
| ·选择标记HPT的扩增检测 | 第77-78页 |
| ·基因组水平上的HPT和目标基因的Southern杂交检测 | 第78-79页 |
| ·目标基因的时空表达模式 | 第79-81页 |
| ·干涉转化植株的RNA水平检测 | 第81-82页 |
| ·超表达转化植株的RNA水平检测 | 第82-83页 |
| ·一个超表达转化体的T-DNA插入位置的确定 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| ·进一步研究的设想 | 第86-87页 |
| ·结论 | 第87-88页 |
| 本文总结 | 第88-89页 |
| 本研究的创新点 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 附录 | 第99-106页 |
| 作者简介 | 第106页 |
