重组人血清白蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达
| 第一章 综 述 | 第1-30页 |
| ·人血清白蛋白 | 第10-12页 |
| ·人血清白蛋白的理化和生物特性 | 第10-11页 |
| ·人血清白蛋白的应用前景 | 第11-12页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第12-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第12-13页 |
| ·毕赤酵母作为表达宿主的菌株 | 第13页 |
| ·表达载体 | 第13-18页 |
| ·外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第18-26页 |
| ·重组人血清白蛋白表达近况 | 第26-27页 |
| ·人血清白蛋白的分离纯化 | 第27-29页 |
| ·重组rHSA分离体系特点 | 第27页 |
| ·rHSA分离方法的进展及现状 | 第27-29页 |
| ·课题的内容和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 重组人血清白蛋白基因工程菌的构建及筛选 | 第30-48页 |
| ·本章目的及研究方案 | 第30-32页 |
| ·研究目的 | 第30页 |
| ·研究方案的选择 | 第30-32页 |
| ·试验材料 | 第32-34页 |
| ·菌种与质粒 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·仪器设备 | 第33-34页 |
| ·试验操作及方法 | 第34-42页 |
| ·质粒的提取及扩增 | 第34-36页 |
| ·重组工程菌GS115-HSA的构建及筛选 | 第36-37页 |
| ·重组工程菌GS115-HSA的诱导表达实验 | 第37-38页 |
| ·rHSA的SDS-PAGE分析及免疫印迹检测 | 第38-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-47页 |
| ·目的基因的验证 | 第42页 |
| ·质粒pPIC9K-hsa溶液的浓度测定 | 第42-43页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第43页 |
| ·G418筛选高拷贝菌株 | 第43-44页 |
| ·摇瓶筛选结果 | 第44-45页 |
| ·菌株的表达模式 | 第45页 |
| ·表达产物的免疫检测 | 第45-47页 |
| 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 发酵条件研究 | 第48-62页 |
| ·本章目的及研究方案 | 第48-49页 |
| ·研究目的 | 第48页 |
| ·研究方案的选择 | 第48-49页 |
| ·试验材料 | 第49-50页 |
| ·菌种 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·仪器设备 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·试验操作及方法 | 第50-52页 |
| ·基础盐培养基发酵 | 第50页 |
| ·发酵液中残余甘油的测定 | 第50-51页 |
| ·Coomassie blue法测定蛋白含量 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-61页 |
| ·甲醇加量对表达的影响 | 第52-53页 |
| ·组氨酸加量对表达的影响 | 第53-54页 |
| ·油酸加量对表达的影响 | 第54-55页 |
| ·硫酸铵浓度对诱导表达的影响 | 第55-56页 |
| ·培养基种类对蛋白降解的影响 | 第56-57页 |
| ·氮源的添加对蛋白降解的影响 | 第57-58页 |
| ·pH对蛋白降解的影响 | 第58-59页 |
| ·培养温度对rHSA的影响 | 第59页 |
| ·PMSF对蛋白降解的影响 | 第59-61页 |
| 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 rHSA的分离纯化 | 第62-69页 |
| ·本章目的及研究方案 | 第62页 |
| ·研究目的 | 第62页 |
| ·研究方案的选择 | 第62页 |
| ·试验材料 | 第62-63页 |
| ·试验操作及方法 | 第63-64页 |
| ·浓缩方法 | 第63页 |
| ·脱盐方法 | 第63-64页 |
| ·离子交换树脂纯化rHSA | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-67页 |
| ·浓缩方法的比较 | 第64-65页 |
| ·脱盐方法的比较 | 第65-66页 |
| ·阴离子树脂对rHSA的分离 | 第66-67页 |
| ·本章的纯化路线 | 第67-68页 |
| 本章小结 | 第68-69页 |
| 结论与建议 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致 谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第77页 |
