| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 一 前言 | 第9-29页 |
| ·原核表达体系的特点及其影响因素 | 第9-14页 |
| ·原核生物表达体系的特点 | 第9-10页 |
| ·决定外源基因在原核表达体系中表达水平的因素 | 第10-11页 |
| ·转录水平上主要因素 | 第10-11页 |
| ·翻译水平上的主要因素 | 第11页 |
| ·翻译起始区(TIR)对原核表达体系的重要意义 | 第11-14页 |
| ·翻译起始区及其自由能 | 第11-12页 |
| ·TIR区自由能及二级结构与G+C含量的关系 | 第12页 |
| ·密码子偏好性对于原核表达体系的重要性 | 第12-14页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子概述 | 第14-19页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子简介 | 第14-15页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子生物学特性 | 第15-17页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子的理化性质 | 第15页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子的分子生物学特征 | 第15页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子的结构与功能 | 第15-16页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子的作用机理 | 第16-17页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子的生物活性 | 第17-18页 |
| ·bFGF的细胞学效应 | 第17页 |
| ·bFGF的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·碱性成纤维细胞因子基因的克隆和表达 | 第18页 |
| ·碱性成纤维细胞因子的纯化 | 第18-19页 |
| ·T7启动子与pET-3c表达质粒 | 第19-21页 |
| ·T7启动子 | 第19-20页 |
| ·pET-3c简介 | 第20-21页 |
| ·pET-3的构建原理 | 第20页 |
| ·pET-3c的应用优点 | 第20-21页 |
| ·分子生物序列分析和实验设计的常用软件DNASIS2.5简介 | 第21-22页 |
| ·本研究的主要任务、设计思路和技术路线 | 第22-29页 |
| ·主要任务 | 第22页 |
| ·设计思路 | 第22-28页 |
| ·随机引物的设计 | 第22-23页 |
| ·hbFGF的TIR区域分析 | 第23-25页 |
| ·实验分析 | 第25-28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| 二 材料与方法 | 第29-42页 |
| ·实验材料 | 第29-35页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·主要化学试剂 | 第29-30页 |
| ·实验菌株 | 第30页 |
| ·DNA材料 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·实验试剂 | 第31-35页 |
| ·实验方法 | 第35-42页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的大量制备 | 第35-36页 |
| ·碱法小提质粒 | 第36页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第36-37页 |
| ·DNA的酶切 | 第37页 |
| ·DNA的纯化 | 第37页 |
| ·DNA的体外连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·转化 | 第38页 |
| ·转化子的快速鉴定 | 第38页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE的电泳分析 | 第38-39页 |
| ·层析方法 | 第39-40页 |
| ·表达产物的免疫学测定 | 第40-41页 |
| ·表达产物的生物学活性测定 | 第41-42页 |
| 三 结果 | 第42-60页 |
| ·表达质粒pET-mbFGF系列的构建 | 第42-44页 |
| ·载体质粒pET-3c的提取与BamHI+NdeI双酶切 | 第42页 |
| ·PCR引物的设计 | 第42页 |
| ·hbFGF基因的PCR扩增和纯化 | 第42-43页 |
| ·hbFGF的基因PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·PCR产物的纯化与酶切 | 第43页 |
| ·pET-mbFGF构建 | 第43-44页 |
| ·DNA片段的体外连接与转化 | 第43页 |
| ·转化子的快速鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组高效表达rhbFGF大肠杆菌的构建和筛选 | 第44-54页 |
| ·转化与重组菌株的诱导表达 | 第44-46页 |
| ·表达菌株筛选 | 第46-49页 |
| ·pET-mbFGF序列测定 | 第49页 |
| ·pET-mbFGF序列TIR区域的二级结构及表达率分析 | 第49-54页 |
| ·重组蛋白的大规模培养、纯化和活性检测 | 第54-60页 |
| ·发酵表达hbFGF | 第54-55页 |
| ·实验步骤 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-55页 |
| ·菌体的破碎离心 | 第55-56页 |
| ·实验步骤 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-56页 |
| ·发酵产物的层析纯化 | 第56-58页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-58页 |
| ·表达产物的免疫检测 | 第58-59页 |
| ·rhbFGF重组蛋白的活性测定 | 第59-60页 |
| 四 讨论 | 第60-66页 |
| ·计算机生物软件应用的积极性和局限性 | 第60-63页 |
| ·关于生物软件的应用前景及其积极作用 | 第60-61页 |
| ·关于采用生物软件辅助分析的局限性 | 第61-63页 |
| ·TIR区域定位的不确定性 | 第61-62页 |
| ·其他区域对表达水平影响的不可预知 | 第62页 |
| ·Zuker的算法及RNA二级结构预测的不稳定性 | 第62-63页 |
| ·关于hbFGF的表达 | 第63-66页 |
| ·基因突变对hbFGF表达水平的影响 | 第63-64页 |
| ·hbFGF包涵体形成和筛选可溶性蛋白菌株的意义 | 第64-66页 |
| 五 实验结论及展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 英文缩略词表 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-87页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
