| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 昆虫病原线虫共生菌杀虫毒素研究进展 | 第12-25页 |
| ·昆虫病原线虫 | 第12页 |
| ·昆虫病原线虫共生菌 | 第12页 |
| ·昆虫病原线虫与共生菌的共生关系 | 第12-14页 |
| ·昆虫病原线虫共生菌产生的杀虫毒素 | 第14-20页 |
| ·发光杆菌/致病杆菌的 Tc（Toxin complex）毒素 | 第14-16页 |
| ·其它细菌中的毒素复合体（Tc’s） | 第16-17页 |
| ·PirAB 二元毒素 | 第17-19页 |
| ·致软毒素（Makes caterpillars floppy）Mcf1 和 Mcf2 | 第19-20页 |
| ·昆虫病原线虫共生菌杀虫毒素的作用位点 | 第20-21页 |
| ·毒素蛋白分泌系统 | 第21-24页 |
| ·一步式分泌系统 | 第21-23页 |
| ·Ⅰ型分泌系统 | 第21-22页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第22-23页 |
| ·两步式分泌系统 | 第23-24页 |
| ·II 型分泌系统 | 第23页 |
| ·V 型分泌系统（自转运分泌系统） | 第23-24页 |
| ·杀虫毒素的应用尝试 | 第24页 |
| ·研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 荧光发光杆菌 TT01 菌株 pirA2B2 基因的克隆表达与杀虫活性分析 | 第25-61页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验材料与试剂 | 第26-29页 |
| ·菌种及载体质粒 | 第26-28页 |
| ·菌种 | 第26-27页 |
| ·质粒 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要溶液的配制 | 第28-29页 |
| ·常用培养基 | 第28页 |
| ·常用溶液 | 第28-29页 |
| ·常用抗生素溶液 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-40页 |
| ·pirA2B2 基因的序列分析 | 第29-30页 |
| ·pirA2B2 基因的序列 | 第29页 |
| ·软件及分析方法 | 第29-30页 |
| ·PirA2, PirB2 和 PirA2B2 融合蛋白原核表达载体的构建 | 第30-34页 |
| ·pirA2, pirB2 和 pirA2B2 基因引物设计与合成 | 第30页 |
| ·TT01 菌株总 DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·pirA2, pirB2 和 pirA2B2 基因的 PCR 扩增 | 第31页 |
| ·目的 DNA 片段的分离纯化 | 第31-32页 |
| ·PCR 产物克隆于 T 载体上 | 第32页 |
| ·CaCl2 法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第32页 |
| ·热激转化法 | 第32-33页 |
| ·质粒 DNA 的提取与纯化 | 第33页 |
| ·pirA2, pirB2 和 pirA2B2-T 质粒 DNA 的双酶切鉴定以及测序 | 第33-34页 |
| ·pirA2, pirB2 和 pirA2B2 基因双酶切片段与原核表达载体的连接 | 第34页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第34-36页 |
| ·大肠杆菌 M15 感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·毒素蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达产物 SDS-PAGE 检测 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白的纯化与定量 | 第36-39页 |
| ·高表达量菌株的筛选 | 第36-37页 |
| ·重组菌的表达时相 | 第37页 |
| ·目的蛋白可溶性分析 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白的大量表达 | 第38页 |
| ·融合蛋白的纯化与脱盐 | 第38-39页 |
| ·蛋白定量 | 第39页 |
| ·生物测定 | 第39-40页 |
| ·血腔杀虫活性测定 | 第39-40页 |
| ·口服杀虫活性测定： | 第40页 |
| ·结果 | 第40-58页 |
| ·pirA2B2 基因序列分析 | 第40-46页 |
| ·pirA2B2 基因在基因组中的位置 | 第40-41页 |
| ·pirA2B2 基因核苷酸的 BLAST 搜索 | 第41-42页 |
| ·PirA2B2 氨基酸序列特征及与 PirA1B1 的比较分析 | 第42页 |
| ·PirA2B2 保守结构域分析 | 第42-43页 |
| ·PirA2B2 蛋白的亚细胞定位 | 第43页 |
| ·信号肽及跨膜结构域分析 | 第43-44页 |
| ·PirA2B2 蛋白二级结构预测 | 第44-46页 |
| ·重组原核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·pirA2, pirB2 和 pirA2B2 基因的 PCR 扩增 | 第46页 |
| ·pirA2, pirB2 和 pirA2B2 基因的克隆与序列测定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·重组表达载体 pQE-pirA2, pQE-pirB2 和 pQE-pirA2B2 双酶切鉴定 | 第47页 |
| ·重组菌诱导表达及产物分析 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白的纯化与定量 | 第48-56页 |
| ·高表达菌株的筛选 | 第48-50页 |
| ·重组菌的表达时相 | 第50-52页 |
| ·目的蛋白可溶性分析 | 第52-54页 |
| ·融合蛋白的纯化与脱盐 | 第54-55页 |
| ·蛋白定量 | 第55-56页 |
| ·生物测定 | 第56-58页 |
| ·血腔杀虫活性 | 第56页 |
| ·口服杀虫活性 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| ·pirA2B2 是二元杀虫毒素基因 | 第58-59页 |
| ·PirA2B2 融合蛋白重组质粒构建与诱导表达 | 第59-60页 |
| ·PirA2B2 融合蛋白纯化和脱盐 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第三章 荧光发光杆菌 TT01 菌株 pirA1B1 基因的克隆及 pirA1B1 基因与 pirA2B2 基因杀虫谱比较 | 第61-74页 |
| ·试验方法 | 第62-63页 |
| ·PirA1B1 融合蛋白原核表达载体的构建 | 第62页 |
| ·pirA1B1 引物设计与合成 | 第62页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第62页 |
| ·融合蛋白的纯化与脱盐 | 第62页 |
| ·蛋白定量 | 第62页 |
| ·生物测定 | 第62-63页 |
| ·血腔杀虫活性测定 | 第62-63页 |
| ·口服杀虫活性测定 | 第63页 |
| ·pirAB 基因分析 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-71页 |
| ·pirA1B1 基因的 PCR 扩增 | 第63页 |
| ·pirA1B1 基因的克隆与序列测定 | 第63-64页 |
| ·重组表达载体 pQE-pirA1B1 双酶切鉴定 | 第64-65页 |
| ·重组菌诱导表达及产物分析 | 第65-66页 |
| ·融合蛋白的纯化与脱盐 | 第66页 |
| ·蛋白定量 | 第66-67页 |
| ·生物测定 | 第67-68页 |
| ·pirAB 基因系统发生分析 | 第68-69页 |
| ·发光杆菌和耶尔森氏菌中 pirAB 操纵子基因结构比较 | 第69-70页 |
| ·PirAB 蛋白保守结构域分析 | 第70页 |
| ·PirA1B1 与 PirA2B2 蛋白杀虫活性对比 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-74页 |
| 总结 | 第74-75页 |
| 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 硕士期间发表论文 | 第89页 |
