| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-17页 |
| 1.1 糖尿病的流行病学及胰岛素抵抗 | 第11-12页 |
| 1.2 糖尿病与肥胖的关系 | 第12页 |
| 1.3 脂肪酸与β细胞凋亡 | 第12-13页 |
| 1.4 Bcl-2 家族与细胞凋亡 | 第13-14页 |
| 1.5 mTOR与Ⅱ型糖尿病 | 第14-17页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 实验动物与实验细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第18-19页 |
| 2.1.4 抑制剂和激动剂 | 第19页 |
| 2.1.5 实验抗体 | 第19-20页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 主要溶液配制方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 PA的配制 | 第21页 |
| 2.2.2 RIPA的配制 | 第21-22页 |
| 2.2.3 10X电泳缓冲液 | 第22页 |
| 2.2.4 1X转膜缓冲液 | 第22页 |
| 2.2.5 IP Buffer缓冲液 | 第22-23页 |
| 2.2.6 RPMI1640 完全培养基 | 第23页 |
| 2.2.7 KRBH的配制 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.3.1 动物实验 | 第23-24页 |
| 2.3.2 口服葡萄糖耐量检测 | 第24页 |
| 2.3.3 胰岛素耐量检测 | 第24页 |
| 2.3.4 胰岛素分泌检测 | 第24-25页 |
| 2.3.5 酶联检免法检测胰岛素分泌 | 第25页 |
| 2.3.6 冰冻组织包埋、切片及染色 | 第25-26页 |
| 2.3.7 细胞复苏、培养传代与冻存 | 第26-27页 |
| 2.3.8 细胞的药物处理 | 第27页 |
| 2.3.9 MTS法检测细胞活力 | 第27-28页 |
| 2.3.10 Western-blot检测 | 第28-30页 |
| 2.3.11 细胞免疫共沉淀 | 第30-31页 |
| 2.3.12 β 细胞凋亡评估 | 第31-32页 |
| 2.4 统计学处理 | 第32-33页 |
| 第3章 实验结果 | 第33-51页 |
| 3.1 高脂饲养C57 小鼠 | 第33-36页 |
| 3.1.1 正常饲养组(NCD)和高脂饲养组(HFD)小鼠血脂、葡萄糖和胰岛素耐力检测 | 第33-35页 |
| 3.1.2 小鼠胰岛染色分析 | 第35-36页 |
| 3.2 PA对 INS-1E细胞的影响 | 第36-39页 |
| 3.2.1 高浓度棕榈酸(palmitate,PA)使细胞活力下降 | 第36-37页 |
| 3.2.2 高浓度PA使细胞凋亡增加 | 第37-38页 |
| 3.2.3 高浓度PA对细胞活力的影响呈时间依赖性 | 第38页 |
| 3.2.4 高浓度PA减少胰岛素分泌 | 第38-39页 |
| 3.3 高浓度PA减少Mcl-1 的表达,抑制m TOR活性 | 第39-40页 |
| 3.4 Mcl-1在PA诱导细胞凋亡及功能丧失中的调控作用 | 第40-43页 |
| 3.4.1 Mcl-1 的敲低和过表达 | 第40-41页 |
| 3.4.2 Mcl-1 敲低增加细胞对PA的敏感性 | 第41-42页 |
| 3.4.3 过表达Mcl-1 抵抗高浓度PA诱导的细胞凋亡 | 第42页 |
| 3.4.4 Mcl-1 表达的变化影响葡萄糖诱导的胰岛素分泌 | 第42-43页 |
| 3.5 高浓度PA使 Mcl-1 泛素化增加 | 第43-44页 |
| 3.6 mTOR及其结合蛋白敲除或者m TOR过表达对细胞的影响 | 第44-48页 |
| 3.6.1 mTOR及其结合蛋白敲除对下游靶点的影响 | 第44页 |
| 3.6.2 mTOR过表达对下游靶点的影响 | 第44-45页 |
| 3.6.3 mTOR及其结合蛋白敲除后对PA引发细胞凋亡的影响 | 第45-46页 |
| 3.6.4 mTOR及其结合蛋白敲除对葡萄糖诱导胰岛素分泌的影响 | 第46页 |
| 3.6.5 过表达mTOR抵抗高浓度PA诱导的细胞凋亡 | 第46-47页 |
| 3.6.6 过表达mTOR对葡萄糖诱导胰岛素分泌的影响 | 第47-48页 |
| 3.7 不同浓度PA作用后AMPK及其下游靶点的变化 | 第48-49页 |
| 3.8 明确AMPK介导高浓度PA对下游靶点的作用 | 第49-50页 |
| 3.9 AMPK对细胞凋亡的影响 | 第50页 |
| 3.10 AMPK对葡萄糖诱导胰岛素分泌的影响 | 第50-51页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士期间学位成果 | 第65页 |
