| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-21页 |
| 1 引言 | 第21-33页 |
| ·过氧化氢酶的研究背景及依据 | 第21-29页 |
| ·活性氧简介 | 第21-22页 |
| ·过氧化氢 | 第22-24页 |
| ·过氧化氢酶简介 | 第24-25页 |
| ·CAT的结构特点和功能 | 第25-26页 |
| ·CAT的类型划分和功能 | 第26-28页 |
| ·CAT的应用现状 | 第28-29页 |
| ·CAT的研究进展 | 第29页 |
| ·藤黄微球菌(Micrococcus luteus) | 第29-31页 |
| ·立题背景及意义 | 第31-32页 |
| ·课题研究内容 | 第32-33页 |
| 2 藤黄微球菌过氧化氢酶发酵条件和酶活特性 | 第33-55页 |
| ·材料与方法 | 第33-43页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·主要试剂及配制 | 第34-36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·分析方法 | 第37-39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·结果 | 第43-54页 |
| ·菌落形态 | 第43页 |
| ·超声破碎条件的优化 | 第43-45页 |
| ·酶活测定 | 第45-47页 |
| ·发酵条件优化 | 第47-53页 |
| ·诱变育种 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 3 藤黄微球菌过氧化氢酶基因原核表达载体的构建 | 第55-81页 |
| ·材料与方法 | 第55-65页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·质粒 | 第55-57页 |
| ·主要试剂及配制 | 第57-58页 |
| ·培养基 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-65页 |
| ·结果 | 第65-74页 |
| ·M.luteus形态特征及镜下结构 | 第65-66页 |
| ·M.luteus基因组提取结果 | 第66页 |
| ·CAT基因的PCR扩增结果 | 第66页 |
| ·Ampicillin及X-gal平板筛选阳性TA克隆结果 | 第66页 |
| ·重组克隆质粒pMD18-CAT的双酶切鉴定结果 | 第66-68页 |
| ·胶回收酶切后的CAT片段和表达载体pProEx-HTa | 第68页 |
| ·重组表达质粒pProExHTa-CAT(P-CAT)的双酶切鉴定结果 | 第68-69页 |
| ·CAT基因的测序结果 | 第69-74页 |
| ·讨论 | 第74-81页 |
| ·高GC含量PCR扩增的特点 | 第74-75页 |
| ·TA克隆载体的特点 | 第75-76页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第76页 |
| ·CAT目的蛋白的氨基酸序列分析 | 第76-81页 |
| 4 藤黄微球菌过氧化氢酶基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第81-101页 |
| ·材料与方法 | 第81-94页 |
| ·材料 | 第81-85页 |
| ·实验方法 | 第85-94页 |
| ·结果 | 第94-99页 |
| ·SDS-PAGE检测CAT融合蛋白的表达 | 第94-95页 |
| ·CAT融合蛋白小量纯化 | 第95-96页 |
| ·CAT融合蛋白大量纯化 | 第96-97页 |
| ·蛋白复性结果 | 第97页 |
| ·CAT酶活测定 | 第97页 |
| ·CAT的pH稳定性 | 第97-98页 |
| ·CAT的温度稳定性 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-101页 |
| ·大肠杆菌pProEx-HTa表达系统 | 第99页 |
| ·CAT融合蛋白的表达 | 第99-100页 |
| ·离心法亲和层析纯化CAT融合蛋白 | 第100页 |
| ·基因重组工程菌与藤黄微球菌酶活比较 | 第100-101页 |
| 5 大肠杆菌生产pProExHTa-CAT的摇瓶发酵工艺研究 | 第101-117页 |
| ·试剂 | 第101-104页 |
| ·菌株及培养基 | 第101页 |
| ·主要试剂 | 第101页 |
| ·影响工程菌生长和目的蛋白表达的因素 | 第101-104页 |
| ·试验方法 | 第104-108页 |
| ·基因工程菌生长曲线 | 第104页 |
| ·基因工程菌发酵条件优化 | 第104-107页 |
| ·正交试验优化发酵因素 | 第107页 |
| ·发酵罐试验 | 第107-108页 |
| ·结果与讨论 | 第108-116页 |
| ·工程菌DH5α/pProExHTa-CAT的生长曲线 | 第108页 |
| ·Bradford标准蛋白曲线建立 | 第108-109页 |
| ·诱导温度工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第109页 |
| ·诱导时机对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第109-110页 |
| ·诱导表达时间对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第110页 |
| ·IPTG浓度对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第110页 |
| ·初始pH值对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第110-111页 |
| ·装液量对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第111页 |
| ·摇床转速对菌体生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第111-112页 |
| ·接种量对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第112-113页 |
| ·种子菌龄对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第113页 |
| ·正交试验确定最佳发酵条件 | 第113-115页 |
| ·优化条件下大肠杆菌DH5α/pProExHTa-CAT的培养 | 第115-116页 |
| ·小结 | 第116-117页 |
| 全文总结 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-124页 |
| 附件 | 第124-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 攻读学位期间发表的学位论文及专利申请 | 第129页 |
