猪流行性腹泻病毒部分S基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 第一部分 前言 | 第8-18页 |
| 1 猪流行性腹泻病毒的研究进展 | 第8-11页 |
| ·病毒的分类及形态特征 | 第8-9页 |
| ·病毒的理化特性 | 第9页 |
| ·病毒的培养特性 | 第9页 |
| ·病毒的基因组结构和复制 | 第9-11页 |
| 2 PEDV的编码蛋白及其功能 | 第11-14页 |
| ·非结构蛋白及其功能 | 第11页 |
| ·结构蛋白及其功能 | 第11-14页 |
| 3 PEDV与其它冠状病毒的抗原相关性 | 第14-15页 |
| 4 PEDV诊断方法的研究进展 | 第15-16页 |
| ·免疫电镜法 | 第15页 |
| ·免疫荧光法 | 第15页 |
| ·微量血清中和试验 | 第15页 |
| ·RT-PCR法 | 第15-16页 |
| ·ELISA法 | 第16页 |
| 5 PED诊断试剂的研究进展 | 第16-17页 |
| 6 本实验的目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二部分 实验内容 | 第18-46页 |
| 实验一 猪流行性腹泻病毒部分S基因的原核表达 | 第18-36页 |
| 1 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·实验方法 | 第21-28页 |
| 2 结果 | 第28-33页 |
| ·目的基因的PCR扩增产物 | 第28-29页 |
| ·原核重组表达质粒的构建 | 第29页 |
| ·阳性重组表达质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第32-33页 |
| ·Western blot分析 | 第33页 |
| 3 讨论 | 第33-36页 |
| ·目的基因的序列分析 | 第33页 |
| ·表达系统的选择 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·关于免疫印迹 | 第34页 |
| ·目的蛋白的活性 | 第34-36页 |
| 实验二 重组质粒间接ELISA检测方法的建立 | 第36-46页 |
| 1 材料与方法 | 第36-39页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-44页 |
| ·抗原最适包被浓度和抗体最佳稀释度的确定 | 第39-40页 |
| ·酶标二抗工作浓度的确定 | 第40页 |
| ·血清及酶标二抗最佳反应时间的确定 | 第40页 |
| ·封闭液的确定 | 第40-41页 |
| ·包被条件的确定 | 第41页 |
| ·显色时间的确定 | 第41页 |
| ·间接ELISA阴、阳性血清临界值的确定 | 第41-42页 |
| ·特异性实验 | 第42页 |
| ·重复性实验 | 第42-43页 |
| ·临床血清样品检测 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| ·ELISA工作条件的确定 | 第44页 |
| ·抗原的纯度对ELISA的影响 | 第44页 |
| ·临床检测结果 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 缩略语表 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 个人简介 | 第53页 |
