| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 1 引言 | 第16-34页 |
| 1 奶牛乳腺炎及其危害 | 第16-26页 |
| ·奶牛乳腺炎的危害 | 第16-17页 |
| ·奶牛乳腺炎的病原菌及其影响因素 | 第17-18页 |
| ·病原微生物向乳房内的侵入机制 | 第18-19页 |
| ·乳腺的防御系统 | 第19-23页 |
| ·乳腺的物理防御系统 | 第19-20页 |
| ·乳腺的细胞免疫机制 | 第20-21页 |
| ·牛奶中的免疫球蛋白 | 第21-22页 |
| ·体液免疫机制 | 第22-23页 |
| ·乳腺炎的症状和分类 | 第23页 |
| ·乳腺炎的监测与诊断 | 第23-24页 |
| ·体细胞计数法 | 第23-24页 |
| ·化验检验法 | 第24页 |
| ·物理检验法 | 第24页 |
| ·乳腺炎的治疗研究现状 | 第24-26页 |
| ·临床型乳腺炎 | 第24-26页 |
| ·抗生素治疗 | 第24-26页 |
| ·重组牛γ-干扰素（rboIFN-γ） | 第26页 |
| ·抗奶牛乳腺炎病原菌复合卵黄抗体（IgY) | 第26页 |
| 2 大肠杆菌Curli 菌毛的生物学特性及其研究进展 | 第26-32页 |
| ·Curli 菌毛的形成机理 | 第26-28页 |
| ·Curli 菌毛的编码基因及其编码的蛋白 | 第28-29页 |
| ·Curli 菌毛引起奶牛乳腺炎的致病机理 | 第29-31页 |
| ·curli 菌毛的研究展望 | 第31-32页 |
| 3 本试验研究的目的意义 | 第32-34页 |
| 材料与方法 | 第34-37页 |
| 1 试验材料 | 第34页 |
| ·实验样本 | 第34页 |
| ·质粒和受体菌 | 第34页 |
| ·基因克隆相关试剂 | 第34页 |
| ·试剂盒 | 第34页 |
| 2 主要试验仪器 | 第34页 |
| 3 试验方法 | 第34-37页 |
| ·纯化回收DNA 片段 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物的连接 T 载体 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·质粒提取 | 第36页 |
| ·重组质粒的酶切回收 | 第36页 |
| ·表达载体的酶切回收 | 第36页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第36-37页 |
| 实验一 奶牛乳腺炎大肠杆菌的分离与鉴定 | 第37-42页 |
| 1 实验材料 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·样品 | 第37页 |
| ·实验菌株 | 第37页 |
| 2 实验步骤 | 第37-39页 |
| ·采集奶样 | 第37页 |
| ·制备伊红美兰平板 | 第37-38页 |
| ·涂板培养 | 第38页 |
| ·纯化 | 第38页 |
| ·液体培养，提取基因组 DNA | 第38页 |
| ·PCR 扩增特异片断 | 第38-39页 |
| 3 实验结果 | 第39-40页 |
| ·引物特异性检测 | 第39页 |
| ·大肠杆菌临床分离株鉴定的部分电泳图片 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 实验二 奶牛乳腺炎大肠杆菌csgA 基因的克隆、序列分析及载体构建 | 第42-51页 |
| 1 材料和方法 | 第42-43页 |
| ·菌种、载体、工具酶和主要试剂 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第42页 |
| ·PCR 反应循环条件 | 第42页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第42-43页 |
| ·csgA 基因重组克隆质粒的构建 | 第43页 |
| ·csgA 序列分析 | 第43页 |
| ·CsgA 蛋白结构预测 | 第43页 |
| ·大肠杆菌csgA 基因重组表达质粒的构建 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-48页 |
| ·PCR 产物分析 | 第43页 |
| ·重组克隆质粒的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| ·序列分析 | 第44-46页 |
| ·CsgA 蛋白的二级结构预测 | 第46-47页 |
| ·CsgA 蛋白的结构域分析 | 第47-48页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| 实验三 奶牛乳腺炎大肠杆菌csgB 基因的克隆、序列分析及载体构建 | 第51-61页 |
| 1 材料和方法 | 第51-52页 |
| ·菌种、载体、工具酶和主要试剂 | 第51页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第51页 |
| ·PCR 反应循环条件 | 第51页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第51-52页 |
| ·csgB 基因重组克隆质粒的构建 | 第52页 |
| ·csgB 序列分析 | 第52页 |
| ·CsgB 蛋白结构预测 | 第52页 |
| ·大肠杆菌csgB 基因重组表达质粒的构建 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-58页 |
| ·PCR 产物分析 | 第52页 |
| ·重组克隆质粒的构建与鉴定 | 第52-53页 |
| ·序列分析 | 第53-56页 |
| ·CsgB 蛋白的二级结构预测 | 第56页 |
| ·CsgB 蛋白的结构域分析 | 第56-57页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 实验四 奶牛乳腺炎大肠杆菌csgC 基因的克隆、序列分析及载体构建 | 第61-70页 |
| 1 材料和方法 | 第61-62页 |
| ·菌种、载体、工具酶和主要试剂 | 第61页 |
| ·引物设计 | 第61页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第61页 |
| ·PCR 反应循环条件 | 第61页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第61-62页 |
| ·csgC 基因重组克隆质粒的构建 | 第62页 |
| ·csgC 序列分析 | 第62页 |
| ·CsgC 蛋白结构预测 | 第62页 |
| ·大肠杆菌csgC 基因重组表达质粒的构建 | 第62页 |
| 2 结果 | 第62-67页 |
| ·PCR 产物分析 | 第62页 |
| ·重组克隆质粒的构建与鉴定 | 第62-63页 |
| ·序列分析 | 第63-65页 |
| ·CsgC 蛋白的二级结构预测 | 第65-66页 |
| ·CsgC 蛋白的结构域分析 | 第66页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第81页 |
