| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 绪论——微管正端跟踪蛋白研究进展 | 第10-39页 |
| ·概述 | 第10-11页 |
| ·微管 | 第11-16页 |
| ·微管研究简史 | 第11-12页 |
| ·微管的基本结构 | 第12页 |
| ·微管的动态不稳定性 | 第12-16页 |
| ·微管正端跟踪蛋白 | 第16-23页 |
| ·末端结合蛋白家族(End-binding family proteins) | 第16-17页 |
| ·细胞骨架结合、甘氨酸富集蛋白质(Cytoskeleton-aSSOCiated proteinGly-rich proteins,CAP-Gly proteins) | 第17-18页 |
| ·含有碱性氨基酸丝氨酸富集序列的蛋白质 | 第18页 |
| ·HEAT和WD-40重复序列蛋白 | 第18-19页 |
| ·微管马达蛋白 | 第19-23页 |
| ·微管正端跟踪的机制 | 第23-27页 |
| ·微管正端跟踪蛋白相互作用的分子结构基础 | 第27-30页 |
| ·CH结构域介导的相互作用 | 第27页 |
| ·EBH介导的相互作用 | 第27-28页 |
| ·CAP-Gly介导的相互作用 | 第28-30页 |
| ·研究微管正端跟踪蛋白相互作用的生物学意义 | 第30-32页 |
| ·微管正端跟踪蛋白相互作用的调控 | 第32-34页 |
| ·磷酸化调节 | 第32页 |
| ·分子内自抑制作用 | 第32-33页 |
| ·α微管蛋白的酪氨酸化和去酪氨酸化 | 第33-34页 |
| ·微管正端跟踪蛋白的生物学功能 | 第34-38页 |
| ·调节微管动态性 | 第34-35页 |
| ·联系微管末端与细胞内结构 | 第35-36页 |
| ·在微管末端施加拉力或者推力 | 第36页 |
| ·招募信号分子 | 第36-37页 |
| ·其他方面发挥的作用 | 第37-38页 |
| ·展望 | 第38-39页 |
| 第2章 微管正端跟踪蛋白TIP150与EB1和MCAK结合 | 第39-77页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-75页 |
| ·鉴定TIP150为一个新的EB1结合蛋白 | 第39-53页 |
| ·TIP150是一个新的微管正端跟踪蛋白 | 第53-61页 |
| ·TIP150与MCAK结合 | 第61-67页 |
| ·MCAK、TIP150和EB1三者存在相互作用的层次关系 | 第67-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| 第3章 TIP150分子生化特性的初步研究 | 第77-85页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·实验结果与分析 | 第77-84页 |
| ·表达纯化TIP150全长 | 第77-80页 |
| ·TIP150在体外以四聚体的形式存在 | 第80-84页 |
| ·讨论和计划 | 第84-85页 |
| 第4章 实验方法 | 第85-100页 |
| ·分子克隆部分 | 第85-87页 |
| ·PCR扩增基因 | 第85页 |
| ·DNA片段回收 | 第85页 |
| ·DNA酶切反应 | 第85页 |
| ·DNA片段的连接 | 第85-86页 |
| ·质粒小抽 | 第86页 |
| ·转染级别质粒小抽 | 第86页 |
| ·感受态的制备 | 第86-87页 |
| ·原核系统蛋白质表达和纯化 | 第87-89页 |
| ·小量表达检测 | 第87-88页 |
| ·蛋白质大量表达 | 第88页 |
| ·带标签蛋白质的一步纯化 | 第88-89页 |
| ·昆虫表达系统 | 第89-95页 |
| ·重组Bacmid的构建 | 第89页 |
| ·DH10BAC感受态的制备 | 第89页 |
| ·转化pFAST质粒到DH10BAC感受态细胞 | 第89页 |
| ·提取重组Bacmid | 第89-90页 |
| ·PCR检测重组bacmid | 第90-91页 |
| ·转染SF9细胞 | 第91页 |
| ·分离病毒上清P1及检测表达 | 第91-92页 |
| ·扩增病毒 | 第92-93页 |
| ·利用悬浮细胞扩增病毒 | 第93页 |
| ·新培养基的适应 | 第93页 |
| ·在Sf9细胞中大量表达蛋白质 | 第93页 |
| ·昆虫细胞的保种和复苏 | 第93-94页 |
| ·HIS-TIP150全长的纯化 | 第94-95页 |
| ·蛋白质-蛋白质相互作用检测 | 第95-96页 |
| ·GST pull down | 第95页 |
| ·免疫共沉淀 | 第95-96页 |
| ·蛋白质自然状态下分子量的测定 | 第96-97页 |
| ·背景介绍 | 第96页 |
| ·分子筛确定蛋白质Stoke半径 | 第96-97页 |
| ·蔗糖密度梯度离心确定蛋白质沉降系数 | 第97页 |
| ·细胞学实验 | 第97-98页 |
| ·脂质体转染细胞 | 第97-98页 |
| ·磷酸钙转染293T细胞 | 第98页 |
| ·免疫荧光实验 | 第98页 |
| ·常用数据处理软件 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 在读期间发表论文情况及取得的研究成果 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
