| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一部分 综述 | 第12-22页 |
| 1 血管内皮细胞生长因子（VEGF）的研究进展 | 第12-16页 |
| ·VEGF 的分子结构 | 第12页 |
| ·VEGF 家族与VEGF 的受体(VEGFR) | 第12-15页 |
| ·VEGF 家族成员 | 第12-14页 |
| ·VEGF 的受体(VEGFR) | 第14-15页 |
| ·VEGF 基因表达及其调控因素 | 第15-16页 |
| ·缺氧和缺血 | 第15页 |
| ·细胞因子 | 第15-16页 |
| ·其它因素 | 第16页 |
| 2 VEGF 的生物学功能及其相关应用 | 第16-19页 |
| ·VEGF 生物学功能 | 第16-17页 |
| ·VEGF 的相关应用 | 第17-19页 |
| 3 血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)研究进展 | 第19-21页 |
| ·结构特征 | 第19-20页 |
| ·功能特点 | 第20页 |
| ·不同组织中的表达 | 第20页 |
| ·VEGF-B 与动物医学的关系及本实验的研究应用意义 | 第20-21页 |
| 4 血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)研究的意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 PET-28A-VEGF-B 的原核表达载体的构建及鉴定 | 第22-39页 |
| 1 材料与方法 | 第22-32页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·模板与载体 | 第22页 |
| ·工程菌 | 第22页 |
| ·酶及主要试剂 | 第22-23页 |
| ·仪器设备 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-32页 |
| ·化学合成基因片段与引物设计 | 第24-25页 |
| ·VEGF-B 基因的常规PCR 扩增与检测 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增产物的回收与纯化 | 第26-27页 |
| ·SDS 碱裂解法提取PET-28A 载体质粒 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物与PET-28A 载体的双酶切产物回收 | 第28页 |
| ·回收产物的连接与转化方法 | 第28-30页 |
| ·重组质粒的筛选鉴定 | 第30-31页 |
| ·基因序列的测定分析 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-35页 |
| ·目的基因的常规PCR 扩增结果 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶提取PET-28A 质粒的检测结果 | 第33页 |
| ·PET-28A-VEGF-B 重组质粒的鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·序列鉴定 | 第34-35页 |
| 3 实验讨论 | 第35-39页 |
| ·PCR 扩增目的基因的特异性 | 第35-36页 |
| ·引物设计的一般要求 | 第35页 |
| ·引物使用及保存 | 第35页 |
| ·引物的另一个重要参数是熔解温度（TM） | 第35-36页 |
| ·热启动PCR (HOT START PCR) | 第36页 |
| ·确定循环数的基本原理 | 第36页 |
| ·目的基因VEGF-B 的制备 | 第36-37页 |
| ·PET-28A-VEGF-B 表达重组体的构建和鉴定 | 第37-39页 |
| 第三部分 PET-28A-VEGF-B 在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第39-52页 |
| 1 材料 | 第39-42页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第39-41页 |
| ·实验仪器 | 第41-42页 |
| ·菌株与重组质粒 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-44页 |
| ·重组质粒PET-28A-VEGF-B 转化BL21(DE3) | 第42页 |
| ·转化子的试表达及保存 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE 电泳操作步骤 | 第42-43页 |
| ·工程菌PET-28A-VEGF-B/BL21(DE3)表达条件的优化 | 第43-44页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第43页 |
| ·最佳IPTG 诱导浓度的确定 | 第43页 |
| ·最佳IPTG 诱导时间的确定 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白表达形式的确定 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-48页 |
| ·重组工程菌在BL21 中的试表达结果 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白PET-28A-VEGF-B 表达形式鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·PET-28A-VEGF-B 在BL21(DE3)中蛋白的诱导表达条件的优化 | 第46-47页 |
| ·重组工程菌培养最佳温度的确定 | 第46页 |
| ·IPTG 诱导时间的确定 | 第46页 |
| ·IPTG 诱导剂量的确定 | 第46-47页 |
| ·重组融合蛋白PET-28A-VEGF-B 的HIS-TAG 亲和层析纯化结果与分析 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| ·重组蛋白纯化的总体策略 | 第48-49页 |
| ·蛋白纯度、得率及对目标蛋白的要求 | 第49页 |
| ·如何保持所纯化重组蛋白质的生物学活性 | 第49-50页 |
| ·如何保证蛋白质纯化的有效性 | 第50页 |
| ·分离纯化的基本原则 | 第50-51页 |
| ·可溶重组蛋白的分离纯化 | 第51-52页 |
| 全文总结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
