| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 文献综述 | 第17-29页 |
| 1 鸡卵巢、卵泡结构及发育特征 | 第17-18页 |
| 2 影响家禽性成熟的因素 | 第18-19页 |
| 3 性成熟相关基因的研究概述 | 第19-24页 |
| 4 与鸡卵泡发育有关的调节因素 | 第24-25页 |
| 5 关于小RNA | 第25-26页 |
| 6 关于基因差异表达研究技术 | 第26-29页 |
| 材料与方法 | 第29-40页 |
| 1 试验材料 | 第29-31页 |
| 2 试验方法 | 第31-40页 |
| 第一部分 鸡FSHR 5′调控区两个突变位点的多态性与功能分析 | 第40-70页 |
| 引言 | 第40-41页 |
| 试验一 鸡FSHR 5′调控区两个突变位点与产蛋性能关联分析 | 第41-49页 |
| 1 试验材料 | 第41页 |
| 2 试验方法 | 第41-42页 |
| ·鸡血液DNA 的提取 | 第41页 |
| ·突变位点及引物信息 | 第41-42页 |
| ·单倍型构建及关联分析 | 第42页 |
| 3 试验结果 | 第42-49页 |
| ·鸡血中提取的基因组DNA 及基因型检测结果 | 第42页 |
| ·FSHR 5′调控区-237、-868 位点在两品种的多态性 | 第42-44页 |
| ·基因、基因型频率及单倍型在品种中的分布 | 第44-46页 |
| ·FSHR 5′调控区-237 和-868 位点多态性与产蛋性能的关联分析 | 第46-49页 |
| 试验二 鸡FSHR 5′调控区突变位点单倍型对调控基因表达的影响 | 第49-58页 |
| 1 试验材料 | 第49页 |
| 2 试验方法 | 第49-55页 |
| ·鸡卵巢颗粒细胞培养用试剂的配制 | 第49页 |
| ·TG+ 和T G-单倍型表达载体构建 | 第49-51页 |
| ·定点突变及AG+ 和AG-单倍型表达载体构建 | 第51-52页 |
| ·去内毒素质粒制备 | 第52-53页 |
| ·鸡卵泡颗粒细胞的分离培养 | 第53页 |
| ·质粒DNA 转染试验 | 第53-54页 |
| ·双荧光素酶活性测定 | 第54页 |
| ·统计分析 | 第54-55页 |
| 3 试验结果 | 第55-58页 |
| ·定点突变测序 | 第55页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第55页 |
| ·鸡卵泡颗粒细胞分离培养 | 第55-56页 |
| ·不同单倍型对报告基因的启动活性 | 第56-58页 |
| 试验三 鸡FSHR 5′调控区突变基因型对卵泡FSHR m RNA 水平的影响 | 第58-70页 |
| 1 试验材料 | 第58页 |
| 2 试验方法 | 第58-61页 |
| ·组织总RNA 的提取 | 第58页 |
| ·反转录 | 第58-59页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第59-60页 |
| ·引物设计 | 第60页 |
| ·统计分析 | 第60-61页 |
| 3 试验结果 | 第61-65页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第61-62页 |
| ·三种基因型FSHR m RNA 在白卵泡中的定量结果 | 第62-63页 |
| ·三种基因型FSHR m RNA 在黄卵泡中的定量结果 | 第63-65页 |
| 讨论 | 第65-69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 第二部分 鸡FSHR 和TNRC6A 基因的表达分析 | 第70-79页 |
| 引言 | 第70页 |
| 1 试验材料 | 第70-71页 |
| 2 试验方法 | 第71-72页 |
| ·组织总RNA 的提取 | 第71页 |
| ·反转录 | 第71页 |
| ·半定量RT-PCR 分析TNRC6A 在17 w 和23 w 卵巢表达 | 第71-72页 |
| ·荧光定量分析TNRC6A 在开产前后不同组织的表达 | 第72页 |
| ·荧光定量分析鸡FSHR 在各级卵泡的表达 | 第72页 |
| ·统计分析 | 第72页 |
| 3 试验结果 | 第72-76页 |
| ·TNRC6A 在17 w 和23 w 卵巢表达半定量结果 | 第72-73页 |
| ·TNRC6A 在17 w 和23 w 不同组织表达 | 第73页 |
| ·TNRC6A mRNA 在23 w 白来航各级卵泡的表达 | 第73-74页 |
| ·鸡FSHR m RNA 在23 w 白来航各级卵泡的表达 | 第74页 |
| ·鸡FSHR 、TNRC6A m RNA 在各级卵泡的表达比较 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 5 小结 | 第78-79页 |
| 第三部分 用cDNA-AFLP 筛选鸡卵巢性成熟差异表达基因 | 第79-97页 |
| 引言 | 第79页 |
| 1 试验材料 | 第79页 |
| 2 试验方法 | 第79-87页 |
| ·组织总RNA 提取及DNaseⅠ处理 | 第79页 |
| ·cDNA-AFLP 分析 | 第79-86页 |
| ·荧光定量RT-PCR 验证差异带 | 第86-87页 |
| ·统计分析 | 第87页 |
| 3 试验结果 | 第87-95页 |
| ·总RNA 提取结果 | 第87页 |
| ·DNaseⅠ去DNA 污染结果 | 第87-88页 |
| ·预扩增和选择性扩增结果 | 第88-89页 |
| ·差异带回收和二次扩增结果 | 第89-90页 |
| ·差异表达片段克隆测序结果 | 第90-91页 |
| ·基因差异表达片段同源比较 | 第91-93页 |
| ·荧光定量PCR 验证差异表达基因 | 第93-95页 |
| 4 讨论 | 第95-96页 |
| 5 小结 | 第96-97页 |
| 第四部分 鸡开产前后卵巢差异表达m RNA 的分析 | 第97-104页 |
| 引言 | 第97页 |
| 1 试验材料 | 第97页 |
| 2 试验方法 | 第97-98页 |
| ·卵巢组织总RNA 的提取 | 第97页 |
| ·表达谱分析 | 第97-98页 |
| 3 试验结果 | 第98-103页 |
| ·提取的总RNA | 第98-99页 |
| ·表达谱分析结果 | 第99-103页 |
| 4 讨论 | 第103页 |
| 5 小结 | 第103-104页 |
| 第五部分 鸡开产前后卵巢差异表达miRNA 的分析 | 第104-111页 |
| 引言 | 第104页 |
| 1 试验材料 | 第104页 |
| 2 试验方法 | 第104-106页 |
| ·差异表达miRNA 的筛选 | 第104-105页 |
| ·小RNA 的提取 | 第105-106页 |
| 3 试验结果 | 第106-110页 |
| ·小RNA 提取 | 第106页 |
| ·Solexa 测序分析 | 第106-110页 |
| 4 讨论 | 第110页 |
| 5 小结 | 第110-111页 |
| 结论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 博士期间发表论文情况 | 第133页 |
