mcrA基因的克隆及其在分析沼气池产甲烷菌多样性中的应用研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| ·研究背景 | 第12页 |
| ·研究目的和意义 | 第12-13页 |
| ·研究目的 | 第12-13页 |
| ·研究意义 | 第13页 |
| ·国内外研究进展 | 第13-21页 |
| 第二章 产甲烷菌mcrA 基因的RFLP 分析 | 第21-32页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第21页 |
| ·样品采集 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·样品微生物总DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·mcrA 基因的PCR 扩增 | 第22页 |
| ·PCR 产物的回收和纯化 | 第22-23页 |
| ·mcrA 克隆文库的构建 | 第23-24页 |
| ·mcrA 基因的RFLP 分析 | 第24-25页 |
| ·测序及系统发育分析 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-31页 |
| ·样品微生物总DNA 的提取 | 第25页 |
| ·PCR 扩增 | 第25页 |
| ·PCR 产物的回收和纯化 | 第25-27页 |
| ·克隆文库的构建及阳性克隆的筛选鉴定 | 第27-28页 |
| ·酶切分析 | 第28-29页 |
| ·测序及系统发育分析 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 沼气池中产甲烷菌的DGGE 分析 | 第32-40页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第32页 |
| ·样品来源 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·样品微生物总DNA 的提取 | 第32页 |
| ·16S rDNA 的PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·产甲烷菌 16S rDNA 的 DGGE 分析 | 第33-34页 |
| ·优势条带的回收及克隆文库的构建 | 第34-35页 |
| ·系统发育分析 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·DNA 提取 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第36页 |
| ·回收和纯化 | 第36页 |
| ·DGGE 分析 | 第36-38页 |
| ·优势条带的回收及克隆文库的构建 | 第38页 |
| ·测序及系统发育分析 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 产甲烷菌mcrA 基因的荧光定量分析 | 第40-48页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·样品采集及样品总DNA 的提取 | 第40页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·引物设计 | 第40-41页 |
| ·标准质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·荧光定量PCR 反应条件的优化 | 第42页 |
| ·荧光定量PCR 扩增曲线的建立 | 第42-43页 |
| ·标准曲线的建立 | 第43页 |
| ·熔解曲线分析 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-48页 |
| ·标准质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·扩增曲线的建立 | 第45页 |
| ·标准曲线的建立 | 第45页 |
| ·熔解曲线分析 | 第45-48页 |
| 第五章 全文结论、工作不足与展望 | 第48-50页 |
| ·全文结论 | 第48-49页 |
| ·沼气池微生物总DNA 的提取 | 第48页 |
| ·PstⅠ酶切分析 | 第48页 |
| ·群落多态性的DGGE 分析 | 第48页 |
| ·RFLP 与DGGE 的比较分析 | 第48页 |
| ·荧光定量分析 | 第48-49页 |
| ·不足与展望 | 第49-50页 |
| ·mcrA 基因RFLP 分析 | 第49页 |
| ·荧光定量不足与解决办法 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |
